drjasionzl

请问老师，我做人直肠粘膜下层的III型胶原纤维的石蜡切片染色时，加了DAB后肉眼都可以看到有黄色出现，未何在苏木素复染封片后，在显微镜下看不到棕色呢？

另外，我做下来的感觉是，作为疏松结缔组织，整个过程中很容易有些纤维脱片，因为我要做图像分析半定量，这样的话给我带来两个问题，第一是结果不准确，第二是因为部分脱片后，在粘膜下层留下了很多空白的区域，当做图像分析时，在选取求阳性组织面积比例是也会造成偏差，请问如何解决？非常感谢

我用微波中高火13min一直从常态加热到煮沸，再自然冷15min，另外，一抗是博士德的。1：50。用的是迈新两步法试剂盒，

谢谢

shanghainese

1. 本人认为没有染上. 不知您的阳性对照如何?

2. 脱片. 可能是组长脱水透明不好, 或者玻片没有做防脱处理.

3. 博士德的一抗有说明书,应该告诉您如何做组化步骤和要点.

drjasionzl

谢谢shanghainese ，我用的是防脱玻片啊，请一个病理老师帮我切的片，看来自己能够控制的减少脱片的方法只有修复时这一步了，明天再试试，谢谢

另外请问我想做图像分析，学校本来有一个图像分析室的，但是太贵了每张切片要20，想请问能不能自己下个软件，再把自己照好的照片输入，做图像分析啊？如果可以哪个软件比较好呢？在哪里可以下得了。另外，如果做图像分析的话，是不是就不用苏木素复染那一步了？谢谢！

还有一点书上写道：非特异染色的一个原因时胶原纤维带电荷，所以要用血清封闭，但我的实验是要观察III型胶原纤维，而且没有用血清（迈新的二步法，他们说可以不用血清），请问如何分辨何为阳性染色的胶原纤维，何为非特异染色呢？

不好意思，问了好多。

shanghainese

图像分析问题，我没有办法帮您解决。
非特异染色的原因不仅仅是胶原纤维带电荷，还要看您用的一抗特异性的好坏。您要是用的一抗特异性不好，没有人帮得了您。
何为非特异染色呢？
回答：简单的说就是染错了地方。

folksmile

download a 'ImageJ' from NIH