鱼越龙门

多谢!
我都是按照常规步奏操作，石蜡包埋，微波炉柠檬酸修复．抗体滴度１：４０-８０，选三个浓度试做．一抗室温下孵育一到两小时，其余几个标记如ki-67,同组织显色都比较好．请问NF-kappaB，是否有特殊要求．在一抗，孵育时间，固定，显色时间等与常做标记是否有不同．谢谢．

[ 本帖最后由 鱼越龙门 于 2007-8-1 21:11 编辑 ]

shanghainese

还要看看抗体是否过期失效.

鱼越龙门

新定的试剂,应该不是过期.有谁作过,点化一下.我看国网上照片,背景色也挺深,自己做时,背景色淡感觉全阴性.但色深了就不好判断假阳性,包括对照.Sample Text

鱼越龙门

shanghainese

鱼越龙门

步骤操作：切片经二甲苯脱蜡后梯度酒精水化，用微波法进行抗原修复（0.01 mol/L柠檬酸钠缓冲液，pH6.0，微波炉加热至92～98 ℃之间并持续30秒,10℃5分钟,交替循环3次），自然冷却后PBS洗3次，蒸馏水冲洗.体积分数为3%H2O2(室温10 min），PBS洗.
除去PBS,加NF-KAPPAB/P50(PBS稀释1:40-80).4℃过夜.
PBS冲洗,除去PBS加A缓冲液,室温30分钟,
PBS冲洗,除去PBS加B缓冲液,室温30分钟,
PBS冲洗,除去PBS加DAB显色.
显微镜下观察,终止显色.
蒸馏水冲洗,苏木素复染,自来水冲洗,1%HCL分化,自来水冲洗,梯度酒精脱水,吹干,树脂封片.
请点化,多谢!!

shanghainese

想了解您用的一抗是多抗还是单抗? 如果是单抗是哪个克垄? 这个抗体能否用于石蜡切片上?
这段没有明白:
PBS冲洗,除去PBS加A缓冲液,室温30分钟,
PBS冲洗,除去PBS加B缓冲液,室温30分钟,

有照片吗?