fengshm96

我有个实验需要脾脏做阳性对照，但是最近做脾脏冰冻切片时总不顺利，老是出现干片，就是刚贴好的片子在室温中出现裂纹，呈现干皮样，甚至翘起来，不知道是什么原因，自己反思了一下，难道是我液氮速冻的时间过长（9s），使得组织冻裂了，请版主指教！谢谢！

shanghainese

你的标本是否在做冰冻包埋之前放在冻箱里很久已经干枯了吧?
新鲜标本不会这样.

fengshm96

没有呀！都是新鲜的，4%PFA灌流后脾脏不变色，取出PFA4℃后固定过夜，30%蔗糖脱水过夜，然后就OCT包埋切片，以前也切过，没出现这种现象，可这几次总是切不好，自己真的想不出来问题在哪里!

shanghainese

引用:

原帖由 fengshm96 于 2007-8-22 11:43 发表
没有呀！都是新鲜的，4%PFA灌流后脾脏不变色，取出PFA4℃后固定过夜，30%蔗糖脱水过夜，然后就OCT包埋切片，以前也切过，没出现这种现象，可这几次总是切不好，自己真的想不出来问题在哪里!

发上几张照片来看看.

fengshm96

片子被我扔了，可惜！反正刚切出来肉眼看起来还好，贴上去还挺平整的，几分钟后就开始出现小的裂纹，并且不断扩大，形成肉眼清晰可见的裂痕，即使眼观看不到明显的翘起的现象，但镜下可见几乎每张片子都没贴牢，因为在镜下组织不在一个平面，或一个层次上，我现在怀疑有以下几个原因;
1、液氮速冻时间
2、未用PB来配制PFA和蔗糖
3、蔗糖脱水时间过长？
请版主指教，谢谢！

fengshm96

怎么上传照片呀！版主能告诉我吗？

shanghainese

按一下右下放的<发表回复>. 然后通过"上传新附件 [+]"来上传照片.

fengshm96

可是回复这里没有看到“上传新附件”这一栏啊！难道有权限的吗？