persev

我做低等生物胚胎发育的冷冻切片，胚胎较小直径约170微米，10%甲醛固定后，琼脂包埋，LEICA冰冻切片机-24

摄氏度，样品放置20min快速冷冻后切片厚10微米。结果发现圆形胚胎全部变形或破裂。


       有可能是温度低了点，样品冷冻时间长了点，但还没有尝试重新做。


       不知道各位有没有遇到过类似的情况，请求各位达人给予解决建议。


         不胜感激！！！

ChenRong

你所说的那么小的胚胎我没做过冰冻，但我觉得大同小异，首先冰冻的是不是不该要固定的呢。其次，既然是胚胎，比较嫩，水比较多。我认为温度在  -16到-18比较合适。>-18容易动过头弄的脆，<-16的温度动的慢，水容易从胚胎中溢出使其变形。时间应该是看见冻住了就要切，组织太小很容易冻坏。

没弄过这么小的东西，这是个人想法。你的温度肯定太低了。

persev

谢谢LS版主建议，我的胚胎样品水分含量相当大。因为是水生动物的胚胎，这也给我的试

验带来很大的困难。样品用普通胶水固定的，应该没什么问题。不知道10微米是不是薄了点？

zhangbinwei158

温度太底是一方面，还有就是可能冻的时间太长了。
  一般水份比较大的组织  冷冻时间稍短一些

persev

谢谢LS各位提出的建议。

czs000

是不该要固定的,估计形成冰晶了。

czs000

切好后在固定，做HE可以考虑用丙酮固定。

persev

我的材料是从外地取回来的，不固定肯定是不行的，取材要好几天甚至是十几天，所以必须取了材料先固定，我做的是碱性磷酸酶染色。

z19710311

如果你下次再做时,先用液氮速冻.