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请教：冰冻切片的固定

xxshining

初级会员

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1# 大 中 小 发表于 2008-9-4 14:49  只看该作者

请教：冰冻切片的固定

我们是在冰冻切片制好后室温放置半小时以上，然后再浸入丙酮4度固定10分钟~~~最后做组化时哗啦啦的掉啊~~~
刚才学习了首页的方法，说应该切好后立刻固定~~但尝试了一次发现浸入丙酮后组织就直接从玻片上飘起了，还被切片的老师训了……
请教各位高手，冰冻切片究竟怎样固定啊

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邱宾涛

新手上路

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2# 大 中 小 发表于 2008-9-5 00:12  只看该作者
刚切完的冰冻切片要在室温下晾干后在入丙酮固定片子就不会飘起来了。你试下看看可以不，当初我实习的时候固定冰冻切片也出现和你一样的问题，用我说的方法做了以后就不掉片子了。

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邱宾涛

新手上路

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3# 大 中 小 发表于 2008-9-5 00:16  只看该作者
你的玻片最好用poly-l-lysine处理一下，在做组化时如果能用胰酶修复就最好不要用热修复。

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bagelo

中级会员

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4# 大 中 小 发表于 2008-9-5 11:55  只看该作者
玻片要用多聚赖氨酸或者APES处理过的，切片后在室温晾干后在用丙酮固定，另外，冰冻切片作组化不需要修复，如果用DAB显色系统，需要用3%双氧水去内源性过氧化物酶，如果做免疫荧光，固定之后直接血清封闭后加一抗就可以了
认真做事，踏实做人！fighting!!

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xxshining

初级会员

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5# 大 中 小 发表于 2008-9-10 10:36  只看该作者
谢谢各位高手的指教  不胜感激啊

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