liujun0304

请教丁老师,masson 染色,胶元染不上蓝色,
Deparaffinize and rehydrate through 100% alcohol, 95% alcohol 70% alcohol. Wash in distilled water

1. Mordant in Bouin's solution, 60°C for 1 hour.
2. Wash in running tap water to remove the picric acid, 5 minutes.
3. Weigert's working hematoxylin, 5minutes.
4. Blue in running tap water for 15 minutes, rinse in distilled water.
5. Biebrich scarlet for 3 minutes.
6. Rinse in distilled water.
7. Phosphotungstic/phosphomolybdic acid for 60 minutes, discard
solution.
8. Transfer directly into Aniline blue for 15 minutes.
9. Rinse in distilled water.
10. 1% Acetic acid for 1 minute, discard solution, rinse in distilled water.
11. Dehydrate, clear, and coverslip.

ylzhao

你用的是试剂盒还是自己配的染液,苯胺蓝很好上色,不过苯胺蓝要用水溶性,不上色是否和苯胺蓝的选择应用有关.

liujun0304

谢谢斑竹
我用的是自己配的溶液,苯胺蓝也是水溶性的(国药产的)；
  其实，正常组织是可以染山上色的，如血管周边；
  然而，肿瘤内部的胶元却很难着色！
近日摸条件：
1. Mordant in Bouin's solution, 60°C for 6 hour.
2.  hematoxylin, 5minutes;
3. Biebrich scarlet for  45sec;
4. Phosphotungstic/phosphomolybdic acid for  60 minutes;
5. Aniline blue for 30 minutes.
肿瘤内部可以着上淡的蓝色，而肿瘤周边的血管下层胶元可以着上很好的蓝色！
望进一步赐教！
谢谢！

ylzhao

媒染1小时就可以,没必要用6个小时.
根据你介绍的情况,,只是着色铰浅,我分析可能是冰醋酸时间作用长了,缩短冰醋酸作用时间试一试.看看有没有改善.
我们使用的方法和你的protocol几乎一样.你第二次的步骤好象没有用1%冰醋酸?另外,磷钨酸/磷钼酸液时间长了也液影响着色,颜色会浅对比度差.红色和蓝色都不鲜艳.磷钨酸/和磷钼酸液作用不需要延长.
http://library.med.utah.edu/WebPath/HISTHTML/MANUALS/MASSONS.PDF

[ 本帖最后由 ylzhao 于 2009-6-1 23:14 编辑 ]

ming0906

这个必须用1%的冰醋酸处理吗？要处理多长时间？