awang

近年来荧光原位杂交检测技术(Fish技术)已应用于日常病理诊断工作中，请同行指点在整个操作过程中应注意哪些细节？谢谢

大志

技术方面：加热预处理的温度和时间；消化时间的长短；加热共变性时杂交液的蒸发；杂交后洗涤是否干净；苏木精对比染色的深浅。
注意事项：加热预处理的温度保证在98oC以上，最好完全煮沸，时间15min；具体消化时间因组织的固定时间、固定方式、切片的厚度而异，建议消化时间5～30min；杂交液滴加后，必须覆盖杂交膜，再用封片胶密封；杂交后洗涤温度最低应在75oC以上，最高不超过80oC；苏木精对比染色不可过深，否则会遮盖杂交信号。
最关键的、最困难的是消化时间的掌握，消化不足会影响杂交效果，消化过度会破坏组织形态。

awang

谢谢您的指点。

阿良

加热预处理的栽玻片温度保证在90度左右，时间20-30min；具体消化时间主要看切片的厚度而自行掌握，建议消化时间3～30min；杂交液滴加后，加盖玻片，用封片胶密封盖玻片边缘；杂交后洗涤温度应在46度左右。最关键的、最难的是消化时间的掌握，消化不足或消化过度影响结果。后洗也不能忽视，严格把握哦。（只是个人意见，仅供参考）