求助
各位老师：
你们好！我是一名研究生，初学病理技术，现做石蜡切片和特殊染色时遇到以下问题，请各位老师指点指点。
1、小鼠股骨切不出片子之前做过一次骨头的石蜡切片，用的是4%多聚甲醛固定的，后面就是常规冲水、脱钙、脱水、浸蜡、包埋、切片，当时至少能贴出完整石蜡片子（约5-6μm），但是部分组织有点脆。为了增加组织的韧性，我查了查文献，第二次便用苦味酸固定（该固定液之前一直在使用，没有发现问题），然后还是常规冲水、脱钙、脱水、浸蜡、包埋、切片，结果切出来的基本上贴不出好片子；另外，为了增加片子观察面积，包埋时我是将骨头“睡着”包买的，以便于切片时沿股骨长轴切片（之前一直是“立着”包埋的，切片时全是横纵切面）。可能是由于组织本身就很小（直径约2-3mm），结果一修蜡块，组织基本就没有了，于是赶紧切片（5μm），结果倒是能连续切片，但明显可以看到骨髓腔的裂缝，然后一贴片子，立马就裂开了，而且切几刀之后，组织就没了，连翻身的机会都没有了。
问题如下：①第二次实验的失败最可能是哪方面的原因？
②苦味酸固定骨头需要注意些什么？
③为了切出来的组织观察面大一点，将骨头“睡着”包埋是否合理，有没有什么建议？
2、番红精-孔雀绿染不出颜色为了检测关节处的软骨组织，我采用了番红精-快绿（也称孔雀绿、坚牢绿）染色，大致步骤是常规脱蜡至水——韦氏铁苏木精染色液（A、B液即用即配）10分钟——水洗10分钟，0.001%快绿（0.01g+水1000ml）5分钟——1%醋酸冲洗10秒——0.1%番红精（0.1g+水100ml）5分钟——水洗2分钟——脱水透明封片，结果是镜下一片红（正常应该是软骨及粘蛋白呈橙色-红色，细胞核呈黑色，背景绿色）；然后我查了一本病理染色教材，同样的染色名称和染色目的，但染色顺序不一样（先红后绿），中间全部用水洗，结果镜下一片绿；最后，我没有办法了，查了一本《实用组织学技术》（第二版，杜卓**编），里面有一种染色方法叫Harmond坚牢绿法（主要目的是染线粒体），用的染料也是快绿和番红，只是配方不一样，快绿用苯胺油配制，番红用50%酒精配制，先绿后红，中间用苦味酸和磷钼酸洗，最后常规脱水透明封片。
染出的结果见附图，但是也有不同情况的绿色掉色。结果老师一看，还比较满意，说继续做得更好一点，我就不知道为什么了，而且。
问题如下：①前两次的软骨染色最可能的问题出在哪里？②有没有其他推荐的软骨染色方法？
3、甲基绿-派洛宁出不来绿色为了染核酸，我们采用了甲基绿-派洛染色，染色液采用的是碧云天直接配制的染色液（编号C0119），染色步骤也很简单，常规脱蜡至水——甲基绿-派洛宁染色液5/10/90分钟——蒸馏水洗——丙酮脱水、透明封片。
染色结果见图（组织为**组织）。无论是染色时间是5分钟、10分钟，还是90分钟，结果都看不见绿色的核（正常细胞核呈绿色或者蓝绿色，胞浆和核仁呈红色），到时非细胞组织中出现了蓝绿色。尽管标本是经过有害处理的，但按这种结果来看的话，这种有害处理也太高级了吧，损害得这么彻底！？
问题如下：①此次实验结果可信不，如果不可信，最大的问题是什么？如果可信，该怎样进一步证实？②有没有其他推荐的核酸染色方法（试剂我们可以自己配制）。
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