全国性免疫组织化学质量控制活动介绍及总结（转载）
此文转载于《临床与实验病理学杂志 》2007 Aug; 23 (4)
全国性免疫组织化学质量控制活动介绍及总结
作者：周小鸽
1 质控活动介绍
免疫组织化学染色在病理诊断中的作用已经得到了广泛的认同。然而,免疫组化是一种多步骤、多因素决定的实验方法,由于各实验室采用的组织处理、染色方法、抗体来源和抗体克隆号的不同,染色结果有时会出现较大差异,不合格的染色切片时有发生。至今相当部分的实验室对免疫组化标准化尚欠足够重视, 不合格的染色结果会影响病理医师做出正确的诊断,因此,免疫组化染色结果的可靠性受到了极大的关注[ 1 ]。在英国、北欧和美国相继开展了免疫组化质量控制工作,建立了一套比较完善的质量控制方法和程序[ 2 ]。为了提高我国免疫组化病理诊断质量和水平,中国病理工作者委员会免疫组化研究中心借鉴国外的先进经验并结合我国的实际情况开始探索一种适合我国免疫组化质量控制的办法。质量控制分为内部质控和外部质控两部分,内部质控由实验室内部自己进行规范管理完成,外部质控是在实验室之间进行。免疫组化研究中心探索的是外部质量控制,其主要作用是能够了解实验室之间的质量差异,及时发现问题,纠正错误,同时发现和推广理想的、标准化的染色方法,推动我们国内免疫组化在病理诊断中的应用与发展。现将本次活动作一介绍。
1. 1 目的 (1)了解我国免疫组化的现状; (2)发现免疫组化中存在的问题; (3)总结和推广规范化的免疫组化技术;(4)改善和提高我国免疫组化质量,最终达到提高病理诊断准确性的目的。
1. 2 原则 (1)自愿参加原则:在中国大陆或港澳台等地区的任何参加免疫组化活动的病理实验室或其他实验室都是自愿的,没有任何行政约束。( 2)客观公正原则:免疫组化质控活动是一项专业性和科学性很强的活动,对结果的评价必须是客观的公正的,不受任何经济和行政利益的影响。为了保证这一原则,评委必须由在免疫组化方面造诣很深专
的组成。(3)开放原则:任何病理实验室都可以参加这项活动,由于最初几次活动为摸索阶段,因此,范围较小,以后逐步扩大,达到饱和为止。
1. 3 组织机构 由中国病理工作者委员会免疫组化研究中心负责组织此项活动。中心由一位主任和两位副主任责。该中心邀请全国免疫组化专家组成评委,评委人数十几名。委托北京友谊医院病理科作为活动的技术支持,包括提供测试用的组织芯片和标准对照片。
1. 4 方法 免疫组化质控活动每年将举办两次。具体方法如下: (1)通过互联网发布本次免疫组化质控测试通知,其
中包括测试方法、注意事项、起止日期、抗体的数量和名称、联系方式,并附免疫组化质控参加表。(2)欲参加者必须预先填写免疫组化质控参加表(每一种抗体填一张表,每次测试3～5种抗体) ,作为注册。参加表的内容包括参加单位使
用抗体和各种试剂以及染色方法、步骤的详细情况,目的是为了便于分析染色不合格切片产生的原因。( 3)免疫组化
研究中心根据注册情况向参加者邮寄免疫组化测试切片,即组织芯片。测试组织片的构成原则: ①中性福尔马林固定的
组织; ②组织细胞保存完好,无坏死出血等; ③多种组织; ④已知阳性和阴性反应的组织; ⑤不同阳性程度的组织; ⑥含
内源性生物素高的组织。( 4)参加者收到测试片后按要求对相关抗体进行染色。染色结束后将测试片寄回免疫组化研究中心。(5)免疫组化研究中心邀请评委对参加者测试片进行集体评议。评议内容包括:阳性信号的定位,信号的强度和分布,交叉反应,背景着色,复染情况。评议结果分为
4级:优(4分) 、良( 3分) 、中(2 分) 、差( 1 分) 。具体标准是: ①优:测试片中所有组织染色非常理想或接近理想。即
阳性信号很强,定位准确,分布恰当,没有交叉反应和背景着色。②良:测试片中所有组织染色都很好,或信号稍弱,但是有轻度背景染色。③中:测试片中所有组织染色普遍太弱,或其中有一个组织出现假阴性或假阳性。④差:测试片中所
有组织染色非常弱,其中几个组织出现假阴性或假阳性。所有评委的分数之和为切片的最后得分。如果得分是“差”和“中”,视为染色不合格,将由质控中心提出改进建议。( 6)在网上(或E2mail)公布测试总体结果,不公布参加者单位名
称,同时将每个参加者的结果通知参加者本人。还包括评委对其技术问题的原因分析及相关的改进建议。( 7)给质控
合格的单位颁发合格证书。( 8)对每次质控活动的结果进行总结。(9)互动,若对质控活动内容有何疑问,可发邮件
至ccp@ccp. net. cn.
1. 4. 1 测试的抗体 见表1。
1. 4. 2 测试的组织芯片 (1)根据每次测试的抗体数量发给每个单位相应数量的组织芯片,每张芯片有多个微组织,
这些微组织中均含有阴阳性对照及不同阳性程度的组织。(2)组织芯片为福尔马林固定,石蜡包埋切片,染色前无需
烤片,可从脱蜡、水化处理开始,按各实验室自己平日的实际情况进行免疫组化染色。( 3)按切片标识分别染色指定的
抗体,请不要自行更改抗体
2. 3 存在的问题及原因分析
2. 3. 1 染色太浅或无色 共有88张切片。原因: ① 修复的温度或时间不够或未修复,即抗原暴露不充分; ②一抗浓
度过低或修复的温度或时间不够; ③ 修复的温度或时间不够或显色时间短; ④检测系统问题; ⑤显色时间短。
2. 3. 2 内源性生物素着色 共有35张切片。原因:未完全封闭内源性生物素。
2. 3. 3 背景太深 共有29张切片。原因: ① 显色时间太长; ②一抗浓度过高; ③修复时间过长; ④抗体过期。
2. 3. 4 染色太深和信号扩散 共有14张切片。原因: ①一抗浓度过高; ②显色时间过长。
2. 3. 5 着色不匀 共有8张切片。原因:抗体覆盖不均或冲洗不彻底。
2. 3. 6 红细胞着色(内源性过氧化物酶) 共有7张切片。原因:内源性过氧化物酶未被消耗。
2. 3. 7 肾小管异常着色 共有2张切片。原因不明。
2. 3. 8 未复染 共有4张切片。
2. 3. 9 阳性组织点数减少 共有30张切片。同一种抗体谱系有差异。在4次质控活动中, CD117染色合格率最低,仅为42%。其原因是多方面的,主要原因是抗原修复不够( 5张切片) ,还有使用单克隆抗体(1张切片)和抗体过期(1张切片) 。
2. 4 推荐的抗原修复方法 见表2。
3 结论
免疫组化质控活动涵盖我国30个省、自治区、直辖市和澳门特别行政区参加。包括全国大中小医院以及生物试剂
公司共134个单位,因此,评审结果能够基本反映出我国目前免疫组化的技术水平,是一份有价值的参考资料。众多单
位自愿参加质控活动,充分表明广大的病理工作者对免疫组化现状的关注和要求改进免疫组化质量的愿望。此次免疫组化染色的总体质量较好,约3 /4的切片达到优良,但仍有约1 /4切片染色不佳,需要改进。染色成功率与抗体有一定关系,成功率高的是CK、CD30、HMB245、vim2entin,合格染色达到90%以上; CD117染色成功率最差,合格染色仅达到42%。经过4次免疫组化质控检测,染色质量有改进趋势。如第一次质控ER 合格率57% ,第三次质控ER 合格率达到
65%。4次质控的总体合格率也逐渐提高,分别为71%、76%、87%和84%。而存在的主要问题是染色太浅和背景
太深,其主要的原因是抗原修复不足,其次是显色时间过长或一抗浓度过高,内源性生物素未封闭或封闭不够的情况也
可见到。同一种抗体存在谱系的差异也应引起注意。目前最需要改进的方面是进行充分的抗原修复。
(本文受中国病理工作者委员会免疫组化质控中心委托撰稿)
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