九日

此文转载于《诊断病理学杂志》2004年2月第11卷第1期

免疫组化SP 法与PicTureTM两步法的比较
作者：张　铭,司少艳,韩瑞刚,郑燕华,景青萍,张建中
1 　材料与方法
111 　材料
11111 　标本　人肾肿瘤旁肾组织10 例,模拟失重状态下恒河猴肾组织5 例,四氧化二氮中毒实验性S2D 大鼠肾组织20例和昆明小鼠肾组织20 例。全部经10 %中性福尔马林固
定,石蜡包埋。
11112 　试剂　HSP270 (鼠抗人IgG) 、G2Jun (兔抗人IgG) 为美国Santa Cruz 公司品,SP 试剂盒(通用型,二抗为生物素标记羊抗兔、大鼠、小鼠、豚鼠IgG) 及PicTureTM两步法试剂盒(通用型) 为Zymed 公司产品,均购自北京中山生物技术有限公司。
112 　方法
11211 　SP 法　①肾组织切片常规脱蜡至水洗; ②3 %的过氧化氢处理10 min 后,PBS 洗3 次,每次5 min ; ③切片入枸橼酸钠缓冲液,加热至95～100 ℃10 min ; ④PBS 洗3 次,每次5min ; ⑤滴加封闭液(10 %山羊血清) 15 min ; ⑥加一抗37 ℃1～2 h(阴性对照用PBS 代替一抗) ; ⑦PBS 洗3 次,每次5 min ; ⑧生物素标记二抗37 ℃15 min ; ⑨PBS 洗3 次,每5min ; ⑩过氧化物酶(HRP) 标记链霉卵白素15 min ; lv PBS 洗3 次,每次5 min ; lwDAB 显色3 min ; lx水洗,苏木精复染、封固。
11212 　PicTureTM两步法　前4 步同上; ⑤一抗37 ℃1～2 h ; ⑥PBS 洗3 次,每次5 min ; ⑦HRP 标记二抗Fab 段37 ℃10 min ;⑧PBS 洗3 次,每次5 min ; ⑨DAB 显色3 min ; ⑩水洗,苏木精复染、脱水、透明、封固。
113 　结果判断　两种方法所得阳性物均呈棕黄色,HSP270阳性细胞为胞质和/ 或胞核着色,C2Jun 阳性细胞主要为胞质着色。
2 　结果
211 　敏感性比较　两种方法在检测肾组织HSP270 和C2Jun时一抗的****稀释度: SP 法为1∶200 ; PicTureTM 两步法为1∶150 ;敏感性SP 法略高。
212 　特异性比较　在采用SP 法的阴性对照中,人和猴的肾组织多数远曲小管和近曲小管细胞呈非特异胞质着色,且颜色较深,大鼠和小鼠肾组织多数近曲小管细胞亦呈非特异胞质着色,远曲小管细胞着色较浅(图1) ;而采用两步法的阴性对照则无非特异着色,背景干净(图2) 。在采用SP 法进行HSP270、C2Jun 免疫组化染色时,由于很强的非特异胞质着
色,使人和猴的肾远曲小管和近曲小管细胞、大鼠和小鼠的近曲小管细胞的阳性结果无法判断,而大鼠和小鼠远曲小管细胞的阳性结果判断不受影响;采用两步法对人、猴、大鼠和小鼠远曲小管和近曲小管细胞HSP270、C2Jun 的检测,阳性结果易于判断(图3～6) 。SP 法特异性染色强度低于PicTureTM两步法。