九日

染色原理和方法设计: 将生物化学中胆固醇溶液在浓硫酸作用下能与邻苯二甲醛产生紫红色反应这一原理移植到组织细胞化学中, 先将组织块或组织切片与邻苯二甲醛作用, 然后加浓硫酸。如果组织或细胞中含有一定的胆固醇, 则呈紫红色反应。试剂: 用冰乙酸( 分析纯) 配制成浓度为0. 5%的邻苯二甲醛( O-phthaldialdehy de, 分析纯) 溶液, 保存于棕色瓶内。浓硫酸( 分析纯) 。组织: 取实验性动脉粥样硬化家兔中的脂肪肝组织, 行胆固醇染色。该脂肪肝组织材料
来源于我们以前的工作, 通过长期连续饲喂家兔高胆固醇和猪油而得[ 2] , 固定于10% 甲醛溶液中, 以类固醇含量丰富的肾上腺皮质作为本法胆固醇染色阳性对照, 以改良的经典胆固醇染色法( Schul tze 法, 碘酸钠显色) 胆固醇染色呈阴性的网膜脂肪组织作为胆固醇阴性对照。
染色:
1. 块染: 将上述组织切成大小适宜、厚度约2～3mm 的组织块, 置于盛有0. 5% 的邻苯二甲醛溶液的青霉素小瓶中, 块染12h ( 过夜) 和块染24h 后行冰冻切片( 本文用恒温冷冻切片机切片) , 在载玻片上向切片组织滴加浓硫酸数滴, 室温下约10 秒钟即可见组织呈显色反应, 加盖玻片后于显微镜下观察。
2. 切片染色: 取上述未经块染、大小适宜、厚度约2～3mm 的脂肪肝组织, 冰冻切片
( 同上) 。在载玻片上向切片组织滴加数滴0. 5%的邻苯二甲醛染色液, 一分钟后再滴加数滴浓硫酸, 室温下约1min 即见组织呈显色反应, 加盖玻片后显微镜下观察。
结　　果
阴性对照、阳性对照和脂肪肝组织胆固醇染色总体情况见表1。Schult ze 法肾上腺皮质中可见蓝绿色颗粒, 呈阳性反应( 图1) 。本法肾上腺皮质中可见橙红色染色的结构, 呈阳性反应。网膜脂肪组织中无论是块染还是切片染色, Schult ze 法和本法胆固醇染色均呈阴性。表1表明本染色对胆固醇类染色具有特异性。
本法脂肪肝组织及细胞中可见紫红色和橙红色显色反应。胆固醇往往呈紫红或橙红色圆形液滴状, 也可见胆固醇结晶, 组织中可见呈紫红色或橙色的胆固醇结晶( 图2) , 细胞内可见呈紫红色或橙色胆固醇结晶和颗粒( 图
3) 。块染标本显色保持时间可达4h。块染12h与块染24h 在显色强度及显色保持时间方面无明显差别。切片组织与邻苯二甲醛试剂作用后在硫酸作用下紫红色显色可保持约4 小时。Schult ze 法脂肪肝组织及细胞中可见蓝绿色显色反应, 证明肝组织和细胞中胆固醇的存在( 图4) 。在该脂肪肝组织的HE 染色图像, 肝细胞中可见大量的脂质空泡。
此文转载于《中国组织化学与细胞化学杂志》1999 年3 月
作者：申　洪　严　凤*