九日

1 　材料和方法
111 　药品及试剂　β2淀粉样蛋白1240 (Aβ1240 ) 、DAB 购自美国Sigma 公司,Aβ1240注射前用无菌生理盐水将其稀释成10μg/μl ,37 ℃下孵育1 周备用。刚果红、甲醇、甘油、氢氧化钾、乙醇、苏木精、盐酸均为国产分析纯试剂,常规配制。
112 　组织切片制备　雄性SD 大鼠,由第一军医大学实验动物中心提供,鼠龄12 周,10 %水合氯醛腹腔麻醉,头部固定在立体定向仪上,剪毛消毒,在头背中部行纵向切口,暴露颅骨,选右侧海马注射Aβ1240 溶液1 μl (10 μg) ,7 天后取标本,制蜡块切片,切片厚度6μm。
113 　染色方法
11311 　改进甲醇刚果红染色一　(1) 石蜡切片常规脱蜡至水; (2) Harris 苏木精染色5～10 min ,自来水冲洗数分钟;(3) 1 %盐酸乙醇分化数秒钟,温水显蓝,自来水冲洗数分钟;(4) 甲醇刚果红染色15 min ,自来水冲洗数分钟; (5) 012 %碱性乙醇分化数秒钟,自来水冲洗; (6) 常规脱水、透明、封片。
11312 　改进甲醇刚果红染色二　(1) 石蜡切片常规脱蜡至水; (2)DAB 显色5～10 min ,其余步骤同改进方法一。
2 　结果
改进甲醇刚果红染色一,Aβ染成淡红色,周围浸润胶质细胞及变性神经细胞染成蓝色,背景清晰(图1) 。改进甲醇刚果红染色二,Aβ染成金黄色,周围围绕一些淡红色,周围浸润胶质细胞及变性神经细胞染成蓝色,背景清晰(图2) 。
3 　讨论
正常甲醇刚果红染色是首先染甲醇刚果红,再染苏木精〔1〕。由于1 %盐酸乙醇分化时往往造成刚果红脱色,与背景染色接近,对比度不强,如苏木精不分化则背景不干净。改进后甲醇刚果红染色,将正常甲醇刚果红染色顺序颠倒,先染苏木精,然后再染甲醇刚果红,避免了盐酸乙醇分化时造成刚果红脱色。本方法适于了解Aβ局部胶质细胞浸润情况,而刘辉等〔2〕先用Nissl 染色,再染甲醇刚果红,同样可得到上述效果,但由于Nissl 染色不能显示胶质细胞,其目的主要在了解Aβ对周围神经原伤情况。因此在进行Aβ病理损害模型研究中可根据目的不同选用不同方法。改进甲醇刚果红染色二,Aβ染成金黄色,周围浸润胶质细胞染成蓝
色,但Aβ并非全部染成金黄色,周围有部分染成淡红色,因此特异性不甚强,主要适用于切片做免疫组化失败,但切片又少,比较珍贵,可改用做刚果红染色,此法也可将苏木精改用Nissl 染色,用于了解Aβ对周围神经原损伤。
此文转载于《临床与实验病理学杂志》　2001 Apr ;17 (2)
作者：徐　斌　陈俊抛　刘　辉　林　煜　姜晓丹　高曲文