九日

1. 材料
取大白鼠背部皮肤组织, 10%中性福尔马林固定, 常规石蜡包埋切片。
试剂
劳克坚牢蓝( Lox ol-fast blue, BDH chemicalsLtd poo le England) ; 砂罗铬花青R ( So lochromecyanine R, 国外进口, 由广州中山医科大学病理教研室凌启波老师提供) ; 碱性品红( basic fuchsin,上海试剂三厂) ; 髓磷脂碱性蛋白( MBP) 多克隆抗体及S-P 试剂盒( Labbled st reptavidin bio tin, 美国Zymed 公司) 。
2. 方法
取大鼠背部皮肤组织, 经10% 中性福尔马林固定24 小时, 常规石蜡包埋, 连续切片4􀀁m, 分5 组,分别作HE 、Lux olfast blue 法[ 1] 、砂罗铬花青法[ 2] 、氢氧化钾-过碘酸-雪夫氏法[ 3] 、及髓磷脂碱性蛋白MBP 免疫组化法染色。
2. 1　Lux ol fast blue 染色
( 1) 切片脱蜡至无水酒精;
( 2) Lux ol fast blue 液染色, 60℃, 8 ～ 16 小
配制法: Lux ol fast blue　　0. 1g
　　　　10% 醋酸　　　　　0. 5ml
　　　　95% 酒精　　　　　100 ml
　　　　配制后过滤使用;
( 3) 经70% 酒精, 入蒸馏水洗;
( 4) 以0. 05%碳酸锂水溶液分色至背景呈灰色;
( 5) 70% 酒精再次分色, 至背景无色;
( 6) 水洗、苏木素—伊红复染;
( 7) 脱水、透明、封片。
2. 2　砂罗铬花青染色
( 1) 切片脱蜡至水;
( 2) 滴加砂罗铬花青染液于切片上, 10 分钟左右;
配制法: 砂罗铬花青R　　　　　0. 2g
　　　　蒸馏水　　　　　　　96 ml
　　　　　10% 硫酸铁铵水溶液　　4 ml
　　　　浓硫酸　　　　　　　0. 5 ml
( 3) 倾去染液, 流水洗1～2 分钟;
( 4) 10% 硫酸铁铵分化至胶原纤维接近无色或呈淡灰色;
( 5) 流水洗5～10 分钟;
( 6) 荧光桃红染液复染数秒钟;
配制法: 荧光桃红( phloxine B) 　0. 5 g
　　　　0. 5%氯化钙水溶液　　　100 ml
( 7) 水稍洗后脱水、透明、封片。
2. 3　氢氧化钾—过碘酸—雪夫氏法
( 1) 切片脱蜡至水, 再至70% 酒精内;
( 2) 0. 5% KOH ( 70%酒精配制) 室温处理30分钟;
( 3) 70% 酒精内浸洗, 自来水洗10 分钟;
( 4) 1%过碘酸氧化10 分钟, 蒸馏水洗;
( 5) Schif f 试剂30 分钟, 流水洗10 分钟;
( 6) 苏木素复染、脱水、透明、封片。
2. 4　MBP 免疫组织化学染色
( 1) 切片脱蜡至水;
( 2) 3%H2O2/ 无水甲醇去除内源性过氧化物酶30 分钟, 水洗, PBS 洗;
( 3) 0. 05%胰蛋白酶消化, 室温10 分钟, PBS洗;
( 4) 10%正常羊血清封闭37℃, 30 分钟;
( 5) MBP 多克隆抗体1∶50, 4℃过夜, PBS 洗;
( 6) 生物素化羊抗兔lgG 37℃ 40 分钟, PBS洗;
( 7) SP 37℃ 40 分钟, PBS 洗;
( 8) DAB 显色;
( 9) 苏木素复染、水洗、脱水、透明、封片。
结　　果
Luxo l fast blue 染色: 髓鞘呈鲜蓝色, 核深蓝色, 胶原纤维粉红色( 图1) 。
砂罗铬花青法: 髓鞘呈鲜蓝色, 细胞核呈深蓝色, 胶原纤维呈粉红色( 图2 ) 。
氢氧化钾—过碘酸—雪夫氏法: 髓鞘呈紫红色,胶原纤维呈淡红色, 细胞核呈淡蓝色( 图3) 。
MBP 免疫组化染色: 髓鞘呈棕黄色, 细胞核淡蓝色( 图4) 。
我们用大鼠背部皮肤组织切片同时进行这四种染色, 而得到的效果也不甚相同
表　髓鞘染色法结果比较
染色方法髓鞘着色
背景清晰度
胶原纤维着色横纹肌着色血管平滑肌着色血细胞着色
特异性
LFB 鲜蓝色± - - - 􀀁
SC 鲜蓝色+ + + + +
KOH-HIO4-Schiff 紫红色+ + + + +
M BP 棕黄色- - - - 􀀁
此文转载于《中国组织化学与细胞代学杂志》2001 年9 月
作者：郝春荣　任大宏　刘绍春
作者单位：华中科技大学同济医学院病理学教研室, 武汉　430030