秕谷

做了有几年的CerbB-2了,用过长岛和DAKO的抗体,做出来的几乎都是强阳性,现介绍具体步骤,请同行帮忙分析,先谢了,最好告知你们的具体步骤:
1.切片,60度温箱6小时,脱蜡,水化,
2.带盒24片装耐高温塑料染色架,盒里加PH6柠檬酸缓冲液,带盒放入高压锅,锅里加水(基于对此方法的怀疑,本人也用过全高压锅里加PH6柠檬酸缓冲液,染色架直接入高压锅的方法,结果也是强阳性)先加热煮沸,后加入切片,盖上盖子及气阀,至喷气,维持两分钟,关火,锅自来水冷却,开盖,取出装片塑料盒,流水冷却,
3.PH7PBS三次各两分钟
4.加一抗室温一小时或4度过夜,PH7PBS三次各两分钟,加二抗室温半小时,PH7PBS三次各两分钟,加新配DAB5-10分钟,
5.CerbB-2几乎全强阳,而其他几十样抗体则阴阳各有.

lijie208239

是不是你的抗体有问题？   你可以做些对照片看看，比如空白对照，如果这样都是阳性那你的抗体肯定有问题 或你的操作方法有问题。

jillwm

要注意是真强阳还是非特异性染色！最好的染色是细胞膜上的阳性定位，胞质染色无或少。高压修复容易造成非特异性染色，特别是膜阳的抗体。建议微波修复。

fangdang

C-erbB-2在乳腺癌中可以出现较多较强的细胞质阳性，但是我们的判定标准是关注细胞膜，而且是完整的细胞膜阳性。给你FDA用DAKO herceptin test的阳性判定标准：0级在肿瘤细胞中无阳性染色或者小于10%肿瘤细胞出现有细胞膜染色。（No staining is observed or membrane staining is observed in less than 10% of tumor cells）
1+===大于10％的肿瘤细胞中出现微弱或者不完整的细胞膜染色。（A faint/barely perceptible partial membrane staining in more than 10% of tumor cells）
2+===超过10％的肿瘤细胞中出现弱到中等强度完整细胞膜染色。（A weak to moderate complete membrane staining in more than 10% of tumor cells）
3+===在大于30%的肿瘤细胞中出现中到高等强度完整细胞膜阳性染色，（A moderate to strong complete membrane staining in more than 30% of tumor cells）
      计数                   结果                           0                        阴性   1+                      阴性    2+                      弱阳性    3+                      强阳性
    HER2过表达情况适合于在进行规范的化疗治疗失败后，采用人源性的单克隆抗体Herceptin®治疗有较好的相关性。（HER2 overexpression is associated with a varied positive response to the humanized monoclonal antibody Herceptin® in patients that have failed standard chemotherapy treatment ）。

何欲语

可以考虑换个公司的一抗

依米花

推荐用BIOGENEX的C-erbB-2,克隆系是CB11.