zhousjplasur

在此请教：

就一个IHC完整的程序来讲，必须要设阳性对照片和阴性对照片（已知确定组织无检测抗原）吗？另外好像有非常多的阴性对照种类，诸如空白对照，同型对照（看了shanghainese的那个同型对照帖子，仍未明了）等等，各有什么用处呢？
所谓的权威的阴性对照应是哪种对照？

[ 本帖最后由 zhousjplasur 于 2008-12-3 00:14 编辑 ]

shanghainese

引用:

原帖由 zhousjplasur 于 2008-12-3 00:12 发表
在此请教：

就一个IHC完整的程序来讲，必须要设阳性对照片和阴性对照片（已知确定组织无检测抗原）吗？另外好像有非常多的阴性对照种类，诸如空白对照，同型对照（看了shanghainese的那个同型对照帖子，仍未明了） ...

• 第一个问题是抗体特异性问题。　抗体应该只与阳性细胞反应，不应该与其他的阴性细胞反应。　如果抗体与其他的阴性细胞反应了，说明这个抗体的特异性有问题，不能用。　病理科医生应该了解所作抗体的特异性和在组织细胞里的分布。　不然无法看片子做诊断。　研究生也一样。
• 阴性对照最好用同型对照。　它的目的是检测抗体本身免疫球蛋白，二抗，Streptavidin-HRP和DAB对组织切片上的非特异性着色。

zhousjplasur

三个问题：
1、以pbs作为空白对照也应该能检测二抗，Streptavidin-HRP和DAB对组织切片上的非特异性着色？
2、“检测抗体本身免疫球蛋白对组织切片上的非特异性着色”，此话何解？是指检测血清中除外一抗以外其它免疫球蛋白或单抗中不同于结合位点的抗原决定簇对组织切片的非特异性染色？
3、我的一抗都是多克隆兔抗人的一抗，我应该以兔血清作为同型对照，对否？

shanghainese

引用:

原帖由 zhousjplasur 于 2008-12-3 11:02 发表
三个问题：
1、以pbs作为空白对照也应该能检测二抗，Streptavidin-HRP和DAB对组织切片上的非特异性着色？
2、“检测抗体本身免疫球蛋白对组织切片上的非特异性着色”，此话何解？是指检测血清中除外一抗以外其它免 ...

回答：

• pbs作为空白对照也应该能检测二抗，Streptavidin-HRP和DAB对组织切片上的非特异性着色。
• “检测抗体本身免疫球蛋白对组织切片上的非特异性着色”，是指检测一抗自身的免疫球蛋白对组织切片上的非特异性着色。
• 一抗都是多克隆兔抗人的一抗，应该以兔血清作为同型对照。

zhousjplasur

“检测抗体本身免疫球蛋白对组织切片上的非特异性着色”，是指检测一抗自身的免疫球蛋白对组织切片上的非特异性着色。

在下愚钝，理解不了，呵呵，譬如：
我一抗都是多克隆兔抗人的一抗，以兔血清作为同型对照。但此血清中并无一抗吧？那如何检测一抗自身的免疫球蛋白对组织切片上的非特异性着色？呵呵，望shanghainese进一步释惑

忘了说谢谢！
shanghainese 建议您找几本好一点的免疫学书看一看。 会对您全面了解免疫学有很大的帮助。

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2008-12-4 00:01 编辑 ]

zhousjplasur

版主有关于同型对照的文献吗？上传分享一下如何？

版主既然提起书，那您认为哪些书值得推荐一下？

[ 本帖最后由 zhousjplasur 于 2008-12-10 18:21 编辑 ]

fangdang

看来你还没弄懂一抗和免疫球蛋白的关系。