caiyangcy

1、玻片脱蜡至水
2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室
温20分钟。
3、pH7.2缓冲液洗三次。
4、胰蛋白酶消化37 ℃，30分钟。（或按说明书要求：放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟，快速冷却；或不处理）
6、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
7、擦去多余血清，加第一种一抗37 ℃，30分钟。
8、pH7.2缓冲液洗三次。
9、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
10、pH7.2缓冲液洗三次。
11、滴加ABC或S-P复合物，37 ℃，45分钟。
12、pH7.2缓冲液洗三次。
13、棕色DAB显色3～10分钟。
14、pH7.2缓冲液洗三次。
15、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
16、擦去多余血清，加第二种一抗37 ℃，30分钟。
17、pH7.2缓冲液洗三次。
18、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
19、pH7.2缓冲液洗三次。  
20、滴加ABC或S-P复合物，37 ℃，30分钟。
21、紫蓝色DAB显色
22、水洗
23、核固红复染，脱水，透明，封固。
双重染色法
1、切片脱蜡至水
2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室温20分钟。
3、pH7.2缓冲液洗三次。
4、胰蛋白酶消化37 ℃，30分钟。（或按说明书要求：放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟，快速冷却；或不处理）
6、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
7、擦去多余血清，加一抗37 ℃，30分钟。
8、pH7.2缓冲液洗三次。
9、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
10、pH7.2缓冲液洗三次。
11、滴加ABC或S-P复合物（辣根过氧化物酶），37 ℃，45分钟。
12、pH7.2缓冲液洗三次。
13、DAB（棕色）或AEC（红色）显色3～10分钟。
14、pH7.2缓冲液洗三次。
15、双标阻断液，10分钟（可不用）
16、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
17、擦去多余血清，加第二种一抗37 ℃，30分钟。
18、pH7.2缓冲液洗三次。
19、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
20、pH7.2缓冲液洗三次。   
21、滴加碱性磷酸酶复合物，37 ℃，30分钟。
22、pH7.2缓冲液洗三次。
23、BCIP/NBT显色（蓝色）
24、水洗
25、甲基绿复染，脱水，透明，封固。
如果选择辣根过氧化物酶可选择DAB（棕色）显色，在第21步用辣根过氧化物酶复合物，第23步用AEC（红色）显色，但要注意的是AEC不能长期保存。如选择另一个为碱性磷酸酶可选用BCI/NBT、AP-Red、AP-Orange，用BCI/NBT显色最好。
（1）伊红（水溶性）
配方：
伊红 （水溶性） 2.5-5 g
蒸馏水 500 ml
将水溶性伊红溶于蒸馏水中，然后加浓盐酸10毫升，充分搅拌，静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次，再过滤；将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥，加95%酒精1000毫升，配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1～2倍稀释，加入1～2%冰醋酸。
此方法具有染色时间快，颜色鲜艳，不容易褪色，使用寿命长等特点。
（2）伊红（醇溶性）
配方：
伊红 （醇溶性） 2.5-5g
75%酒精 1000 ml
加几滴冰醋酸至半透明状。