求助CerbB-2
做了有几年的CerbB-2了,用过长岛和DAKO的抗体,做出来的几乎都是强阳性,现介绍具体步骤,请同行帮忙分析,先谢了,最好告知你们的具体步骤:
1.切片,60度温箱6小时,脱蜡,水化,
2.带盒24片装耐高温塑料染色架,盒里加PH6柠檬酸缓冲液,带盒放入高压锅,锅里加水(基于对此方法的怀疑,本人也用过全高压锅里加PH6柠檬酸缓冲液,染色架直接入高压锅的方法,结果也是强阳性)先加热煮沸,后加入切片,盖上盖子及气阀,至喷气,维持两分钟,关火,锅自来水冷却,开盖,取出装片塑料盒,流水冷却,
3.PH7PBS三次各两分钟
4.加一抗室温一小时或4度过夜,PH7PBS三次各两分钟,加二抗室温半小时,PH7PBS三次各两分钟,加新配DAB5-10分钟,
5.CerbB-2几乎全强阳,而其他几十样抗体则阴阳各有.
