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丁老师,伊红染色不太好,该如何解决?

丁老师,伊红染色不太好,该如何解决?

丁老师:

       我做的是小鼠胚胎脑组织切片!
      我用的伊红配方是沉淀酸化伊红Y乙醇液,但是最后封片观察发现,伊红染色特别淡,请丁老师帮助解决,谢谢!我的切片浸入伊红染液的上一步是在95%乙醇浸泡3分钟。
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二甲苯1-------------------------8 min
二甲苯2-------------------------8 min
无水乙醇------------------------2 min
95%乙醇-------------------------2 min
75%乙醇-------------------------2 min
自来水洗
苏木精浸染----------------------5——10 min   Gill改良苏木素液
自来水洗
1%盐酸乙醇分化---------------数秒     
自来水洗                                    
50℃温水蓝化-------------------1 min
自来水洗

95%乙醇-------------------------3 min
伊红染色-------------------------3——10秒   沉淀酸化伊红Y乙醇液
自来水洗
脱水——透明——封固:
95%乙醇--------------------- 2秒
无水乙醇-------------------- 5秒
无水乙醇--------------------3~5秒
无水乙醇--------------------1min
二甲苯1---------------------5 min
二甲苯2---------------------5 min
中性树胶封固、晾干(制片流程结束)


丁老师,我最后发现伊红染的很淡,苏木精染的还可以;
还有切片从伊红染液里出来后,要不要经过水洗这一步骤?还有我这染色步骤有没有哪地方需要改动的?

[ 本帖最后由 fydapg 于 2008-9-21 06:39 编辑 ]

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丁老师,能否说清楚点,哪一步要加入85%酒精,大概脱水多长时间?

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我染的是小鼠胚胎神经组织。请问伊红染色时间应该是怎么样,以前一位老师说伊红染色时间若超过10秒,会太红的,最后片子会看不清的。

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伊红染好后用85%酒精分化一下,后面一步直接进入95%乙醇脱水吗?

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