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我的nestin免疫荧光背景过深怎么办?

我的nestin免疫荧光背景过深怎么办?

我的实验方法:
1. 脑组织石蜡切片脱蜡至水,3%H2O2 1min;
2. PH8.0的EDTA微波修复,先高火8min煮沸,然后中火20min;
3. 0.1M PBS洗3次/5min,加5%BSA室温10min;
4. 加入一抗,稀释液就用0.1M PBS,4°C过夜;
5. 0.1M PBS洗3次/5min,加入FITC(Nestin)和TRITC(GFAP)1h;
6. 50%缓冲甘油封片。
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