请教丁老师及各位前辈
丁老师：
您好！我用TUNEL法检测原位细胞凋亡情况，试剂盒是德国宝灵曼的，碱性磷酸酶/bcip（nbt）显色系统。结果应该是只要凋亡细胞着色，可我做的结果是很多细胞核与核膜均有着色。不知道是试剂有问题，还是我的方法上有问题？我把我的方法介绍一下，请大家指点指点，谢谢！
1）切片常规脱蜡、水化。（2）PBS（PH7.4）冲洗3次，每次5分钟。（3）加入20μg/ml蛋白酶K，温盒内37℃下消化30分钟。（4）PBS冲洗3次，每次5分钟。（5）加Tunel液（I液和II液按1：9混合而成），阴性对照片仅加II液，温盒内37℃下孵育60分钟。（6）PBS冲洗3次，每次5分钟。（7）加荧光素抗体，湿盒内37℃下孵育30分钟。（8）PBS冲洗3次，每次5分钟。（9）加入新鲜配制的BCIP/NBT，显微镜下观察显色30分钟，自来水冲洗。透明、中性树胶封片。
