请丁老师指点
请丁老师指点
丁老师你好,我是一名在读研究生,做的课题是涎腺的腺样囊性癌,检测指标为P27,一抗为Zymed公司产品，SP试剂盒是Zymed的通用型试剂盒，DAB显色试剂盒也是Zymed的产品，不过我同学比我早一个礼拜买的是ABC三种试剂用前配，我买的DAB却是AB两种试剂用前配制，产品编号一致，我的说明书上也说是只有A和B俩样试剂，1毫升双蒸水加各一滴。参考多数有关p27的文献一抗浓度定为1：50，一抗4度过夜，2，3抗室温半个小时。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。现在出现的问题是：
1：加上DAB显色时，放到显微镜下马上就普遍出现棕黄色，整个视野都是，而看文献P27一般是细胞核着色，部分细胞浆也有着色，我做的片子细胞核着色要吗就很不明显，要吗就是所有的细胞核都是着色，根本看不到蓝染的细胞核。
2：用PBS代替一抗做的阴性对照的背景上也有淡淡的黄色。
3：看资料说腺上皮来源的组织和肿瘤中内源性生物素呈强阳性表达，就你的经验来看，涎腺组织做免疫组化是不是需要阻断内源性生物素呢？？？有文章介绍说用蛋清来进行阻断内源性生物素，不知道是否可行？？？？
恳请给予指导！！！！！！！！
