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免疫荧光染色问题,求助!

白杨小小

新手上路

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1# 大 中 小 发表于 2007-11-20 19:41  显示全部帖子

免疫荧光染色问题,求助!

请问冰冻切片免疫荧光染色中如果triton浓度过高或作用时间过长是否会导致背景过深,定位不准确,如应该是细胞核定位却出现细胞浆染色,10um的冰冻切片triton浓度和时间应该多少合适?;另外冰冻切片DAB显色一抗浓度1:100,效果不错,如果用免疫荧光标记该浓度是否合适?微波抗原修复方法是否适用于免疫荧光标记,会不会加深背景?急需指导,非常感谢!!

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白杨小小

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2# 大 中 小 发表于 2007-11-21 21:09  显示全部帖子
我是做小鼠脑组织冰冻切片，多聚甲醛固定，一抗是在核内表达的转录因子，该抗体说明书要求用0.3%PBS/triton 稀释抗体，可是片子背景很深，胞浆染色而不是胞核染色，不知道什么原因，请赐教！

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白杨小小

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3# 大 中 小 发表于 2007-11-22 20:27  显示全部帖子
未加阴性对照的背景同样深，至于特异性我已经用ＤＡＢ显色证实是有效的，就是用免疫荧光标记不上，很奇怪不知道原因所在．

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白杨小小

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4# 大 中 小 发表于 2007-11-23 12:55  显示全部帖子
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