关于免疫荧光细胞化学
请教丁老师:
我做细胞骨架蛋白的免疫荧光细胞化学,一抗和二抗都用的是Sanda Crudz公司的,一抗浓度从1:100到1:600 都试过,可是背景染色还是很深,而胞浆内却没什么染色. 二抗我用稀释度是1:100,我的方法是
1.pbs 洗3分钟3次
2.甲醇固定20分钟
3.丙酮5分钟
4.pbs 洗3分钟3次
5.一抗37度1小时
6.pbs 洗3分钟3次
7.二抗37度1小时
8.pbs 洗3分钟3次
9.甘油封片
丁老师能帮我找找原因吗？二抗的稀释度是不是不合适?谢谢!
