【求助】免疫组化染色不均的问题
各位老师好,最近在做组化的过程中出现局部染色不均的问题,具体情况表现为组织着色出现左阴右阳或外有内无(见
下图),而更令人奇怪的是这种情况基本都出现在左侧端(近标签侧),根据以上情况,我以个人工作经验分析整理了
一些原因,但都被自己一一推翻
1、我首先想到的是操作台不平整,导致湿盒没有放置水平:但同样的操作台和湿盒,同时却没有出现这个问题,而且我
在后来的工作中特意将湿盒一端垫高,情况仍存在,排除
2、抗体没有完全覆盖组织表面:在上述情况出现后,我特地注意过这个问题,并且矫枉过正地在问题侧加大试剂滴加范
围,未见好转,排除
3、脱蜡不净:情况出现在同侧,并且已延长脱蜡时间
4、滴加抗体未打均匀:即用型抗体同样存在这个问题
5、修复:修复结束后,打开盒盖,发现修复液未完全覆盖切片,可能导致修复不完全。这个原因其实是我认为可能性最
大的,并且一度将其锁定为直接原因,但一次发现修复液覆盖完全的情况下居然也出现同样问题
在下跟请各位老师在百忙之余为我分析原因,指点迷津,在下百拜!
另:操作方法为maxvision,微波修复