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我们科里有两台免疫组化机，平时也做手工免疫组化，但是流程跟你的稍有区别，我们手工做出来的没出现过你这种情况。
1、烤片 70°C 1小时
2、三缸二甲苯 ，100%酒精，95%，90%，80%至水洗。
3、柠檬酸修复  高压锅，水开后放片子，出气后计时1分20秒 ，停止，冷水降温（中间换2-3次降温的凉水），一定要等柠檬酸修复液凉了才可以。
4、PBS冲洗5分钟两遍。
5、双氧水修复12min
6、PBS冲洗5分钟两遍
7、加一抗，一个小时（室温大于23度）
8、PBS冲洗5分钟两遍
9、加二抗，半小时
10、PBS冲洗5分钟两遍
11、DAB显色


这是我们的手工免疫组化的步骤，希望能帮到你。