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求助:掉片

我的经验是烤片的温度能让片子上的蜡能融化就行,一般略高于包埋蜡的熔点。烤片时间最好半小时以上。
还有就是你返蓝採取的是稀氨水还是自来水?自来水返蓝一般不会掉片。
如果不是这些因素,那就要看你脱水的程序有没有什么问题了。
还有一个问题就是你的玻片,是否清洁?如果玻片不清洁,也有可能掉片的。

[ 本帖最后由 淡若水 于 2008-9-5 19:45 编辑 ]

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4楼说的也是一个原因,快速石蜡切片,非常容易掉片,就是因为制片过程中脱水没有普通石蜡切片的脱水好。至于你的组织块是不是太硬,你自己在切片时感觉容不容易切就知道了,太硬,切片时,是切不出完整的薄的片子的。
你说的烤片的情况,应该是没有问题的。
不要以为流水冲洗,就真的是用自来水来冲洗,组织贴附在载玻片上,又没有粘附剂,哪儿能经受得起水的不断冲刷?要求流水,其实质不过就是不断的更换新的自来水而已。我是用缸接自来水洗片的,遇到容易掉片的组织时,动作更要小心轻柔。返蓝时,只要片子上的苏木素洗干净了,就可以浸泡在自来水里,(其间可以根据情况,再更换几次自来水),让组织自然返蓝,浸泡的时间,以细胞核已经变成了清楚的蓝色了,就可以了。可以十几分钟,也可以半个小时。也可以在显微镜下观察分色和返蓝的效果,时间长了,你自己就知道多长时间合适了。以前老师傅说的越久越好,说经过这样处理后,片子储存的时间不管多久都不会变色,不过,我试的结果,泡上3-4个小时,好像苏木素的颜色也会变淡。
至于载玻片的问题,新玻片肯定要清洗一遍,除非你买的是免洗玻片。从节约成本来看,其实大可不必用免洗玻片。我的师傅,当时还是用的专门配置的玻片清洗液,有毒,也麻烦。后来看见别人直接用洗涤剂浸泡,我也改用家用洗涤剂,浸泡24小时后再用自来水洗净洗涤剂,有条件的话,也可以用95%酒精再浸泡一次,烘干备用。我现在连酒精那步都免了。效果也不错。不过,玻片放到洗涤剂里,得一张一张的丢,如果一盒一盒的倒,大部分玻片中间是进不去洗涤剂的。不久前,看见杂志上一篇介绍洗涤盖玻片的文章,我按文章介绍做,结果,根本洗不干净,后来我改成一张一张的将盖玻片丢进盐酸酒精。才解决了这个问题。
现在开展了免疫组化,染片过程中,步骤更加复杂,更容易掉片,片子的清洁更重要。
遇到怎么也要掉片的组织,我是用在载玻片上涂上薄薄的一层甘油蛋白来解决,再不行,我就涂乳白胶了,只是后者本身也会被伊红淡染,片子没有那么美观了。
如果是做免疫组化,那就应该用专门的粘附剂了,这方面最近的杂志有文章介绍这方面的经验。因为我的医院小,没有开展这项工作,没有体会,如果你有需要,看有没有这方面的高手能解答你的问题。当然,你也可以去查杂志,我是在《诊断病理学杂志》和《临床与实验病理学杂志》上看到有这样的文章的。

[ 本帖最后由 淡若水 于 2008-10-3 06:34 编辑 ]

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