淡若水

在病理制片中用TO代替二甲苯的的体会            在病理制片中用TO代替二甲苯的的体会    因为现在的单位在病理制片中，一直用TO代替二甲苯制片，所以我也只有继续接着用TO。最初抱着怀疑的态度来看待这种试剂。经过大半年的使用和观察，发觉TO确实优点不少，特此介绍一下我的体会。    在脱水透明浸蜡这一步里，经酒精梯度脱水，用TO透明，然后浸蜡。在切片时感觉和二甲苯做透明剂没有区别，组织没有发硬变脆的感觉。我们的蜡块，提供给上级医院做免疫组化，病人返回过一例淋巴瘤的免疫组化片子，片子非常漂亮，既薄也没有刀痕。如果我们的蜡块不好，上级医院也切不出这样的片子的。     在第一次用TO做为脱蜡剂染切片时，看见经过最后一步80%的酒精，水洗后玻片上有略浑浊的水滴时，好像和二甲苯时这一步的透明不同，我担心染色效果不佳，但是片子出来后，染色效果完全没有影响。解决上述问题，其实也简单，就是注意及时更换TO后的各步酒精，保持酒精应该有的浓度，彻底洗去TO，水洗时玻片便可以变得清澈透明。     封片前，TO也可以在无水酒精后使用，我们用的3缸，每缸2-3分钟即可。采取湿封法，片子没有干封那样的微小气泡。虽然也有气味，但是气味较小，是松节油的那种气味。     二甲苯是苯类试剂，是有毒的，解决办法要么就是采取隔离操作，要么就是加强通风换气。     TO试剂瓶签上介绍无毒。不知道有没有可靠的资料，证明它也是有毒的？如果确实没有毒，或者毒性小于二甲苯，我觉得还是值得用TO代替二甲苯的。

淡若水

我没有经手买过，问科室主任，说大概比二甲苯贵一半。但是从我使用中观察，似乎消耗比二甲苯要小些，因此实际上费用比二甲苯贵不了多少。
从瓶签的说明来看，这种试剂主要成分是松节油。虽然说明书介绍可以溶解封固剂，但是我觉得真的用TO稀释变浓稠的封固剂，效果并不好。但这并不影响封片时，即使载玻片上残留有TO，用二甲苯稀释的封固剂加盖片时仍然切片透明。

淡若水

下面是用TO代替二甲苯制作的蜡块切片染的免疫组化：


[ 本帖最后由 淡若水 于 2010-12-18 19:53 编辑 ]

淡若水

冬天，气温低，我觉得脱蜡时，载玻片边缘的蜡滴因为要厚点，脱蜡时不易脱净。但是切片中有组织的部位因为蜡熔掉流走了，蜡不多，还是能脱干净，因此对染色效果没有影响。只是片子边缘这些少量残留的蜡，要用手指甲将它刮掉。
不知道其他厂家的同类产品有没有这样的现象？

淡若水

不知道为什么不能传图，只有将本例其余免疫组化的图片传到华夏病理的技术交流区同样的标题下了。一并请丁伟老师评讲。
谢谢！

淡若水

在这个冬天，使用TO时，又发现了两个问题。

一个是南方冬天，室内没有暖气，室温与室外温度相差无几，当室温低于20度以后，切片作HE染色时，用TO脱蜡效果不好，两缸脱蜡时间延长到30分钟，切片上仍然有残余蜡。问本院用过TO的技术员，过去是采用烤箱加热到40-60度脱蜡。我将脱蜡的两缸改回二甲苯，问题就解决了。因为过缸时沥干试剂的时间很短，所以二甲苯在空气里挥发的时间也很短，几乎闻不到什么气味。最后封片时的3缸仍然用TO。

染片在二甲苯或TO里浸过后，放在室外风干，我也注意到，同样的时间，如果是二甲苯，半个小时，可以挥发干净，而TO试剂4-5个小时也不会干。显然，二甲苯的挥发性大大高于TO，同样长的操作时间，室内二甲苯的含量必然是大大多于TO 的含量。

另外，TO对脂肪组织的脱脂效果不好，脂肪组织，经过酒精逐级脱水后，在TO里浸5个小时，再重新和别的组织一起进入脱水机，最后制成的蜡块切片的感觉与没有经过这样处理的一样，仍然非常难切。而经过二甲苯较长时间浸泡脱脂的，切片效果要好许多。

总之，我觉得用TO制片和用二甲苯制片没有太大的区别。

如果二甲苯真的会使白细胞下降的话。那么二甲苯虽然不会直接致癌，但是白细胞下降必然引起免疫力的下降，那样一来，不但会引起别的疾病，也是会间接致癌的。器官移植使用了免疫抑制剂，AIDS引起的免疫缺陷，其结果都会导致恶性肿瘤的高发的。

所以我认为，如果没有通风橱，如果制片的量比较大，只要可能，还是应该尽可能减少二甲苯的使用为好。

淡若水

关于TO本网站曾经讨论过，shanghainese 版主发的那个帖，主要是讨论的TO 的毒副作用。
发表于 2005-11-23 01:04  [讨论]松节油(Turpentine oil)的毒性
[这个贴子最后由shanghainese在 2005/11/23 11:46pm 第 2 次编辑]

松节油. 产品英文名, Turpentine oil.
一、健康危害
  侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。
  健康危害：对皮肤粘膜有刺激作用，对中枢神经有一定的麻醉作用及膀胱刺激作用。急性中毒：引起眼及上呼吸道粘膜刺激症状：流泪、咳嗽等；高浓度蒸气可引起麻醉作用，出现平衡失调及四肢痉挛性抽搐、流涎、头痛、眩晕，可引起膀胱炎，有时有肾损害。慢性影响：长期接触可发生呼吸道刺激症状及乏力、嗜睡、头痛、眩晕、食欲减退等。对皮肤既是原发性刺激物，引起脱脂、干燥、发红等，又可引起过敏性皮炎。
二、毒理学资料及环境行为
  急性毒性：LD505760mg/kg(大鼠经口)；LC5012000mg/m3  6小时(大鼠吸入)；29000mg/m3,2小时(小鼠吸入)；人吸入4.2～5.57g/m3，眼刺激流泪、头痛、恶心；人经口150ml，致死；人经皮0.001%，皮肤接触后干燥、发红、干裂等。
  亚急性和慢性毒性：小鼠经皮240g/kg×20周，最小中毒浓度。
  危险特性：其蒸气与空气形成爆炸性混合物，遇明火、高热能引起燃烧爆炸。与氧化剂能发生强烈反应。若遇高热，容器内压增大，有开裂和爆炸的危险。
  燃烧(分解)产物：一氧化碳、二氧化碳。
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------
◎松節油 Turpentine oil
　臨床症狀︰症狀為腹部灼燒感、嘔心、嘔吐、腹瀉、小便困難、血尿、意識不清、淺呼吸、 驚厥。
　口服︰15mg的揮發油如松節油就可以造成死亡。
　吸入︰造成眩暈，快而淺的呼吸、心跳加快、支氣管刺激、意識不清或痙攣。
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------
【毒性及燃爆性】刺激眼睛、鼻、咽喉；吸入浓度过高，引起头痛、头昏、恶心、精神错乱、脉搏加速、损伤肾功能、肌肉抽搐，甚至死亡；接触会灼伤眼睛，致皮肤过敏，产生湿疹。
          本品易燃，容器在火中爆炸，爆炸下限：0.8%。

【个人防护】严禁烟火；穿防护服，避免皮肤接触；戴护目镜，避免眼接触；选用适当的呼吸器。

我的看法是，以上情况都是浓度比较高的情况下发生的，实际工作中，我们接触的环境浓度远远小于上面那些情况。

淡若水

冬天天冷最好染色开始的脱蜡用二甲苯，温度对二甲苯脱蜡的影响没有TO的明显。脱蜡换缸的时间短，二甲苯挥发在空气中的量应该不大。

TO时间用久了，染缸周围容易有黄色的粘稠的糊状物，但是用蘸有酒精的棉球很容易将其除去。

原来我还以为只有我们才在用TO，后来听给我们供货的商家说，附近几家大型医院也在用TO。看来，用TO的医院也并不少，只是很少看到有人谈谈自己的体会。

国内还有那些品牌的TO我不知道，进货是科室主任。我们现在用的是广西芩溪市松香厂的。
过去的价是32元一瓶（500ml），商家说，最近涨价了，38元一瓶了。二甲苯好像是12-16元一瓶。贵一倍多，不过，我觉得还是值得的。

网上能查到的TO的毒副作用，两个极端，一说无毒，一说，毒性也不小。不知道那些长期使用TO的医院，这方面有什么体会。如果主要是空气吸入，那也是可以用换气扇来稀释的。

当然还有一个问题，我同样关心，TO对病理切片的质量还有那些不好的影响？

淡若水

二甲苯有一个毒副作用，就是可能会导致一些人粒细胞减少，这是大家公认的。二甲苯虽然不会直接致癌症，但是免疫力下降，却是间接致癌的一个因素。似乎松节油（TO）没有看到有这个作用。
话又说回来，现在在制片的过程中，实际上，有条件的医院，技术员接触二甲苯的机会已经微乎其微了。自动脱水机、自动染片机、自动封片机。许多过去直接接触二甲苯的工序，已经由机器代替了。现在随着医院条件的改善，加强通风的问题，也是很容易解决的，而且这也是最简单有效的减少毒副作用的办法，这一点，对应对TO的毒副作用，也是有效的。
和现在病理科的条件比，过去的条件更简陋。病理人，也是这样走过来的。只要注意防范，有些问题完全是可以避免的。大可不必像害怕瘟疫一样，谈二甲苯色变，躲的远远的。须知量变才会导致质变，没有一定的量的积累，也不会导致身体的改变的。就像放射线和辐射可以致病一样，实际上人体天天在接触这些东西。
同意丁伟老师的意见，现在有的厂商利用大家恐惧二甲苯的心理，推出许多替代品，实际上，价高，制片效果不好，而且有没有毒副作用，只有天晓得，大家倒是应该多长个心眼，免得成了试验品。

淡若水

我看厂家的瓶签上介绍的TO的理化性质，提到TO在25度以上才能以任意比例和95%的酒精溶和，如果北方的工作温度低于这个温度，用TO来脱水或透明应该是不理想的。
TO用于病理制片，似乎国内80年代就开始有人在用了，但是网上却查不到究竟始于何时。
我过去大部分时间都是用的二甲苯，在现在的单位，入乡随俗，才改用TO，也只用了一年。上面的东西，也是在使用中所观察到和想到的。有些观点可能是对的，也有些可能是错的，希望听到对TO的不同看法。