fenghaozi

请教关于TUNEL
片子做出来棕**太深，到了发黑的程度，兰色稍微偏淡，以下是我的主要操作步骤，问题出在哪里，谢谢
片厚５um，加样约为５０微升覆盖两个半捞片
未用3%双氧水甲醇封闭,采用S-P试剂盒中过氧化物酶阻断剂封闭,时间5分钟

胃蛋白酶孵育20分钟，20ug/ml

调亡试剂孵育90分钟

Con-POD孵育30分钟

DAB显色5分钟

苏木素复染2分钟

未用盐酸酒精分化，考虑到复染时间短，未予分化

另外Enzyme　Solution和Label Solution的配比我看到有好几种，具体应遵循什么样的原则进行配比，我的是神经元细胞，试剂盒是北京中杉金桥的