zjj1986

做免疫组化也有一段时间了，虽然偶尔也会出现一些小问题，但是都可以找出原因自己解决的。但最近遇到的事情却让我很头疼，希望大家帮忙看看问题出在哪里。
步骤：1.常规切片脱蜡至水
2.3％过氧化氢孵育10min高压修复：1600W 冒气后 1min 10s自来水冷却
3.水洗后PBS洗5次，每次3min
4.一抗孵育(室温)1h后水洗，入PBS洗5次，每次3min
5. 二抗孵育（室温）30min后水洗，入PBS洗5次，每次3min
6.DAB显色
7.苏木素复染后封片
修复液和PBS是买的迈新的粉末自己加蒸馏水配的。DAB是买DaKo公司的。
我们做的时候一直没用血清封闭，因为买的是DaKo的二抗,本身有封闭的功效。
以前做的时候一直挺好的，最近老是出现DAB显色的时候一片黄染，检查过很多试剂，应该是没问题的。第二天重新做又回复正常了。可是昨天的片子做出来又是这种情况，今天重做还是不是很好，虽然有些还能看，但有些真的是不行，找又找不出原因。真快疯掉了。
还有另外一个问题就是DAB 显色的时候颜色还是很好的，可是苏木素复染后封片之后显微镜下看的时候，发现原先的DAB显色的颜色好像褪色了一样，有些地方只有些影子，边上一些黄黄的影子像是晕染开来似的。
想请教一下各位老师，帮忙解决一下。

zjj1986

谢谢各位。
我们的DAB试剂盒确实是和二抗放在一起买的。