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被烦扰很久的一个问题,求各位同行及老师提点

应该不是脱蜡不干净,也不是滴抗体过程中组织过干燥,你说说你操作步骤!
(本观点纯属本人意见!仅供参考!)

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引用:
原帖由 5833001 于 2011-7-26 00:19 发表
常规切片——烤片2小时——三缸二甲苯浓度递增脱蜡——三缸酒精浓度递减脱二甲苯——热水洗片5分钟(水温约70度)——冷水洗片5分钟——转入PBS磷酸缓冲液中洗片三次,第一次洗片5分钟,后两次洗片约3分钟——TBS工作 ...
1、烤片两小时(建议58-60°)不知道你是多少°烤片;
2、热水洗片5分钟建议不用;
3、修复液要看抗体的修复需要,Tris缓冲液(TBS)很少用,一般都用柠檬酸缓冲液;
4、3%过氧化氢一般室温即可(其余也如此);
5、3%过氧化氢后一般不需要用流水冲洗,直接PBS洗三次,每次3-5分钟(其余也如此);
6、DAB显色一般在3-5分钟(镜下观察);
7、苏木素可以稍微在长点,但不能与HE一致,苏木素染色后建议还是需要在盐酸酒精分化,在蓝化。
(纯属本人个人意见)
(本观点纯属本人意见!仅供参考!)

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