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被烦扰很久的一个问题,求各位同行及老师提点

被烦扰很久的一个问题,求各位同行及老师提点

   每次做出来的免疫组化片子都会有一个共同的问题,就是片子上总是局灶性或者完全性覆盖着一层灰蒙蒙的东西,不知道是什么,早期怀疑是脱蜡不完全,但是现在片子的脱蜡时间都是每缸二甲苯10分钟。。。。又怀疑过是否是滴抗体过程中组织过干燥,但是现在组织带水分湿润操作还是这样的结果,很想知道这种灰蒙蒙的物体到底是个啥,求各位老师能指导下~谢谢,问题片子如下图,MPO尤为明显的分界线,而CD38以及CD79a则呈完全性模糊不清





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常规切片——烤片2小时——三缸二甲苯浓度递增脱蜡——三缸酒精浓度递减脱二甲苯——热水洗片5分钟(水温约70度)——冷水洗片5分钟——转入PBS磷酸缓冲液中洗片三次,第一次洗片5分钟,后两次洗片约3分钟——TBS工作液(ph约为6.2)高压修复2分钟——自然冷却后(一般都放在高压锅隔夜)滴加3%过氧化氢封闭内源温箱孵育(30度)10分钟——先用流水冲洗3分钟,后PBS液洗片2次,每次3分钟——开始按指标滴加一抗,温箱孵育(30度)一小时——PBS液洗片三次,每次三分钟——滴加二抗检测,温箱孵育30分钟——PBS液洗片3次,每次三分钟——DBS显色液显色约10分钟——流水冲洗2分钟——苏木素复染约40秒——温水反蓝——95%酒精,无水酒精脱水——二甲苯透明——封片

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