guting2006

今天做了一批片子结果全是阴性，奇怪！起初还以为是DAB的问题，换了新的也没用，接下来想到二抗的问题，可是昨天的结果还好的啊，用的同样的二抗啊，奇怪了！条件都没变过，vim都没出来，奇怪！哦，对了，我今天因为比较忙，所以二抗孵育时间一结束，就洗了泡在PBS里，3个小时左右，再显的色，不过这个应该没有问题啊，而且我后来挑了几张重新上二抗，再显色也没有出来。郁闷中，希望大家帮我找找原因。谢谢

guting2006

二抗是HRP的，这个也有关系的？嗯，再试试吧，谢谢

guting2006

是啊，但是我后来又从里面挑了几张重新上二抗，再显色也没有出来啊。感觉奇怪，我们用的是DAKO的显色剂，一个小瓶一个大瓶，不知道浓度， ，而且还特意再加点H2O2，换新的DAB也不行，时间绝对够久

guting2006

引用:

原帖由 王华 于 2011-11-21 21:42 发表
有没有可能是PBS泡得太久，二抗结合的HRP解离了，与二抗分开了，所以DAB显色不了？而二抗还与一抗结合住，所以再上二抗也没有效果。

呵呵......纯属猜测，没有确切理论依据哦！提出来只是让大家拓宽一下思路而已啦 ...

很厉害，王老师，谢谢，很有可能。我们现在就是怀疑在ＰＢＳ里面泡的太久的缘故。