风清扬

微量原位PCR策略
原位PCR技术集PCR的敏感和细胞形态完整保存的原位检测为一体，为同时在细胞水平和分子水平检测靶基因提供了良好的方法。我们提出了一种策略，可在普通PCR机上使用，完全克服玻片的热传递不稳定性，且试剂用量极微，成本可大为降低。在细胞悬液组织，如血液，精液，脱落细胞等方面有应用前景。
     原位PCR技术的一大障碍，是玻片的热传递不稳定性，专用的玻片法PCR机可克服这个障碍，但大多数临床实验室现有的是管式PCR机。通常的做法是在普通PCR机的加热装置上放置金属板，玻片放在金属板上。封胶封固放应液和标本 在其上进行扩增。这种方法有几个技术难点。1 热传导不均匀。2 标本固定不容易，有脱片的可能性。3 封胶封固较麻烦。
     于是我们考虑对于细胞悬液组织，不用玻片法而用微管法从理论上说应该可以达到理想的效果，用微管法有几个优点。1 传热均匀 2 不必用封胶，也不担心脱片，减少操作难度 3 试剂用量极少。