aline

[这个贴子最后由aline在 2003/12/19 10:49pm 编辑]

先谢谢两位。我是刚接触免疫组化，很多东西都不懂，还是在摸条件的阶段。最近在做肾穿组织，一抗是MHCII,做了抗原修复，高压方法，DAB显色不了，不知道是不是过程有问题？

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这两天做的片子已经有阳性结果，但不是很好。步骤如下：肾穿组织石蜡切片脱蜡-高压修复3或4分钟-0.3%过氧化氢5分钟-一抗4oC过夜-二抗1h（已标辣根过氧化酶）-DAB显色-苏木素复染。也做了阴性对照，背景很干净。其他片子阳性部位不是很明显。

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一抗是浓缩型，二抗是即用型。我们咨询了公司，他们建议二抗一小时，所用的免疫组化法是由公司提供的方法进行，其实类似PAP法，只是辣根过氧化酶仪标记在二抗上。还有我们做过血清封闭，与不做没有区别，公司的技术员认为做与不做也是没有区别的。所以我省略了这一步。孟老师说的不能酒精脱水及二甲苯透明那应该使用什么？显色为什么使用AEC？衬染色为什么也不能使用含有酒精的苏木精？还有就是为什么要加胰酶消化1－3分钟？谢谢！