王华

根据本人的观察，在免疫组化操作中最容易被忽略的问题有以下几个（越是熟练的技术员越容易出现哦！）
一、组织脱蜡不干净
    石蜡的化学成分是24~35个碳原子的烷烃，甲基为疏水基团。蜡在组织中残留多就完全阻隔了抗体与组织结合，导致局部假阴性；残留的少，烷烃分子的疏水作用就使石蜡分子非特异性的与抗体结合，导致局部假阳性。
   解决：1、保证脱蜡时间足够（我用五缸二甲苯，每缸保证3分钟）；
         2、脱蜡剂及时更换；
二、组织脱二甲苯不干净
    这是造成“阴阳脸”与局部染色不均的常见原因，二甲苯（或别的脱蜡剂）残留在组织上，一入水，二甲苯就会因为表面张力的原因聚集在一起，有二甲苯残留的地方抗体完全不能与该处的抗原结合，导致该处完全阴性，与旁边的阳性组织有一个明显的分界线。脱蜡剂残留对HE影响不是很明显，但对免疫组化就影响大啦！
   解决：1、勤换酒精，保证入水前一缸酒精没有脱蜡剂。
         2、过酒精别太快啦！保证每缸1分钟，上下晃荡几下。

   从你给出的图片来看， 估计就是以上两个原因引起的
   大家把注意力过多的盯在修复、加一抗、加二抗、显色上了，其实免疫组化的成败优劣在于每一步都要做到位，每一步都要达到需要达到的效果才行啊！脱蜡、脱二甲苯的工作，病理科做了几十年了，对越是熟悉的工作就越容易忽略。
   做免疫组化的大忌：心急！
   把心放平和一些，把每一步做到位，凡事并不是越快越好，高质量是需要一定时间的。
   （个人观点，仅供参考）

[ 本帖最后由 王华 于 2010-7-14 08:16 编辑 ]

王华

丁老师说得很对，脱蜡不干净会出现不规则的点状区域，但只是表现之一，在实际操作中的细节处理不同引起的脱蜡不净的程度不同就会有不同的表现。
脱蜡时间长短、最后一缸脱蜡剂中来的含量多少、过酒精时间长短、最后一缸酒精中脱蜡剂的含量多少，使用不同种类的的脱蜡剂，以上五方面只要不同，引起的效果是不一样的。如果是蜡残留合并脱蜡剂残留，二者残留的量不同，那么表现就更“匪夷所思”啦！
“带球过人”提到：组织着色出现左阴右阳或外有内无，而更令人奇怪的是这种情况基本都出现在左侧端（近标签侧），使用的微波修复。
片子估计是标签端在上竖着放在修复液里修复的吧？如果有脱蜡剂残留，在修复过程中，脱蜡剂比水轻，就会逐渐聚集在组织的上端，片子竖着放“阴性”就在近标签侧，如果侧着放“阴性”就在向上的一侧，如果平着放出现“阴阳性”的区域那就没有规律啦。
我个人的建议：换干净的脱蜡剂和酒精（最好各4~5缸），脱蜡每缸保证3分钟，酒精每缸保证1分钟，再试试吧！
            
自爆内幕：以上免疫组化问题在我刚做免疫组化时出现过的，经过总结反思修正，没有再出现过类似现象。呵呵。。。
                    
（个人观点，仅供参考）