个人认为,配制苏木素染液,关键是操作者要掌握反应原理,知道苏木素氧化的原理,无论用什么氧化剂,媒染剂,都能配出好用的苏木素染液的。
以下是本人一点认识:
根据碘酸根氧化还原半反应式:2IO3-+12H++10e- → I2+6H2O(可惜不能编辑上标与下标)
推出碘酸钠与苏木素的氧化反应方程式:6C16H14O6 + 2NaIO3 → 6C16H12O6 + I2 +6 H2O + 2Na+
6摩尔的苏木素与2摩尔的碘酸根反应,折算成质量是1克苏木素与0.2克碘酸钠反应。
无论是用碘酸钠还是碘酸钾,起氧化作用的都是碘酸根,无非是碘酸钠与碘酸钾的分子量不同,使用的量有一点小差异(碘酸钠的分子量为197.9;碘酸钾的分子量为214)。
但请注意:1、这是理论值,在实际工作中,我们使用的是分析纯的碘酸钠,含量比较保证,而苏木素的含量就不是很保证了,所以碘酸钠的使用量要减少,避免氧化过度使染液中的一级氧化物苏木红含量减少,引起染液染色能力下降。我配制的量是1克苏木素用0.1克碘酸钠,如果某批次的苏木素质量不太好就减少碘酸钠的量,使用0.08克。2、碘酸根的标准电极电位值是1.195,得电子的能力强,在配制过程中待硫酸铝苏木素混合溶液降到室温后再加碘酸钠。因为苏木素分子含有4个羟基,仅氧化一个羟基称为羰基才是我们需要的氧化苏木素,如果氧化反应过快,苏木素分子的羟基同时被氧化2个或2个以上,苏木素的颜色就会改变,如果四个羟基都被氧化,就是无色的了(试剂手册中有苏木素及氧化苏木素的分子式,我认为作为病理技术员应该熟记。)。
再说一说媒染剂,无论是硫酸铝钾还是硫酸铝,起作用的只有铝离子,铝离子最外层电子层进行SP杂化形成能量相同的SP杂化轨道,可以接受孤对电子形成配位键(螯合反应),氧化苏木精的羰基中的氧原子最外层轨道含有孤对电子,能与Al3+++、Fe3+++等金属离子形成外轨型配合物,成为螯合物。氧化苏木精通过金属离子与细胞核内DNA双链外侧磷酸基上带有孤对电子的氧原子形成配位键而使细胞核内的DNA着色。
12水硫酸铝钾的摩尔质量为474,12水硫酸铝的摩尔质量为509,区别在于1摩尔硫酸铝钾只含有1摩尔铝离子,而1摩尔硫酸铝含有2摩尔铝离子,要得到同等铝离子的浓度,使用的量就不同。
[ 本帖最后由 王华 于 2011-10-28 15:48 编辑 ]