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新手询问

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我是安徽某学校学免疫的研究生,也需要做病理切片,但是技术很不过关,有时送安医附院请人帮忙切片,那片子真让我们羡慕啊。今天看了该论坛的很多帖子,受益匪浅,非常感谢!

以下说说我们实验室坐病理切片遇到的问题:

1、小鼠肝组织或脾脏脱水包埋后,切之前也放入冰箱冷冻10min左右,切片时感觉组织非常脆,有时组织都成粉末了,必须用湿纸巾贴在组织面才能切完整。不知道这个问题是不是由于脱水过多造成的?感觉组织里没有浸蜡,切出来的片子摊片时组织和腊很容易分开。

2、问些小问题,做冰冻切片时,切过后立即用甲醇固定后,染色时需要用缓冲液洗洗吗?一般就是PBS么?另外冰冻切片要保存该如何操作呢?是固定后保存还是固定前保存?

3、做组化时,用3%H2O2去除内源性过氧化物酶有时有大量气泡,正确的做法应该是什么呢?

谢谢大家,不懂的问题还有很多,还望不吝赐教。

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