九日

　淋巴组织疾病的诊断是外科诊断病理学的难点之一,而
制作出精良的淋巴组织切片对于正确诊断至关重要。在日
常会诊工作中,有时所谓的“疑难病例”往往是因为制片不良
而造成的。由于淋巴组织富于细胞而间质较少,因此其制片
过程与其他组织相比有自己的特点。那么,如何制作出一张
理想的淋巴组织切片呢? 根据我们的体会,有以下几个环节
需要注意。

1 　固定
送检的新鲜组织应由初检医师剔除周围脂肪组织,切开
并立即固定于新鲜的4 %的中性甲醛液中,固定时间取决于
甲醛的穿透力、取材的大小和厚度等,常温下以8～24 h 为宜
(图1) 。固定时间短易造成脱水、切片着色不佳(图2) ;固定
时间过久影响免疫组化显色。淋巴结无论大小都要切开固
定,因为淋巴结的包膜是较为致密的结缔组织,会阻碍固定
液的渗透。
2 　脱水
固定好的淋巴组织,应从低浓度乙醇开始脱水,而在
95 %乙醇中的时间应长一些,大约需4 h 左右,以便使淋巴组
织及少许脂肪组织彻底脱水;在进入二甲苯之前,要在无水
乙醇与二甲苯等量混合液中处理30 min ,这样效果更佳。
3 　浸蜡和包埋
浸蜡这一步最为重要,最好用56～58 ℃熔点的蜡,浸蜡
温度为58 ℃,此时容器内的蜡是固体蜡与液体蜡的混合液,
这时的浸蜡条件为最佳。蜡的熔点过高会导致组织内出现
裂缝,或导致淋巴周围组织变硬,而中心浸蜡不佳。浸蜡最
好分3 步,每步1 h 即可,然后将浸好蜡的组织立即包埋于58
～60 ℃的石蜡中,包埋时组织不要在空气中暴露过久。
4 　切片
切片时要注意以下几点: ①石蜡组织块不要冻得太硬,
否则切片时易出现碎沫; ②粗削组织块时,不能切得太厚,否
则易使组织块内部碎裂; ③切片刀要锋利,切片厚度为3～
4μm为宜;切片太厚,不仅诊断困难,染色过程中还容易脱
片; ④捞片时水温不能过热,否则易使组织破裂,结构不完
整,水温一般以45～48 ℃为宜; ⑤烤片的温度为68 ℃,HE 染
色烤片为10 min ,免疫组化染色烤片时间为45 min ;烤片温度
过高会影响免疫组化的染色效果; ⑥冷冻淋巴结组织切片
时,设操作室温度为- 20 ℃,一定要慢削组织块,然后快刀薄
切,一般切6μm厚切片看细胞,再切8μm厚切片看结构。苏
木精染色的颜色要深,分化时间要充分。
5 　免疫组化染色
免疫组化不仅有助于鉴别反应性增生疾病与淋巴瘤,也
是淋巴瘤分型的重要依据。虽然在理论上十分简单,但真正
做到实验结果的稳定、可靠也不是件容易的事,因为除了以
上所列的诸多因素外,还受到孵育时间、温度、湿度、PH 值、
试剂质量和人为因素等影响。
511 　非特异染色的消除　在免疫组化中,抗原—抗体特异
性结合并显色为特异性染色;而非抗原—抗体反应的显色为
非特异性染色。为了消除非特异性染色,在染色中应注意以
下几点: ①去除内源性过氧化物酶的影响; ②染色过程中每
一步都要充分洗涤; ③选择质量好、染色稳定的抗体; ④显色
时间不宜过长,应以显微镜观察的结果控制时间,以5 min 左
右为宜,一般不要超过10 min。
512 　抗原修复　通常可参照第一抗体的说明书进行,但对
每一种新购的抗体,在应用于外检之前都要在本实验室进行
最佳实验条件的摸索和优化。例如: ①在做CD3 和ALK染
色时,说明书中提示微波热修复,但我们发现用微波和胰酶
双修复效果更好,所以在以后的实验中一直都采用这种修复
方法。②CD5 和cyclin D1 这两种抗体在染色时用pH919 的
抗原修复液进行修复,由于从高pH 值中将切片取出非常容
易干燥,所以抗原修复之后要将放有切片的抗原修复液在室
温下冷却20 min 左右,既防止切片干燥,同时又使抗原得到
充分的修复。③对于CD35 抗体,用pH 6 的缓冲液微波修复
40 min ,再加一抗染色,能够得到比较好的染色效果。
513 　染色失败的弥补　对于那些固定、脱水欠佳的组织,最
好采用一抗4 ℃孵育过夜的方法。如果染色不理想,可以从
一抗开始重复染色过程,但显色时应注意掌握时间,不宜过
长,以免增加染色背景。
6 　体会
无论是HE 染色还是免疫组化染色,操作过程中每一步
都非常重要,除使用各种不同浓度的梯度乙醇和标准的染液
外,还需要技术人员很强的责任心,每个步骤都不能使切片
干燥,要在显微镜下观察控制着色,直到封固为止。一般通
过认真摸索、总结,都能制作出精良的淋巴组织切片。

作者：王德田,罗玉凤,曹金伶,万建伟,陈　杰
作者单位：　(中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院病理科, 北京　100730)
转载杂志：J Diag Pathol ,August 2005 ,Vol . 12 ,No. 4
                   诊断病理学杂志

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