新一代环保型病理试剂的应用与体会
本文着重介绍应用GS 无醛无苯全程处理液制备的石蜡切片进行HE 染色、免疫组化染色、免疫荧光组化双重标记和原位杂交效果的比较。
1 材料与方法
1. 1 材料300 例人体组织标本，100 例实验动物组织样本。
1. 2 试剂①GS 标本套装试剂( 内含无醛固定液、环保脱水、透明、浸蜡液，HE 染色液和脱蜡液、透明液及封片胶) 为哈尔滨格林标本技术开发有限公司提供;②多聚物酶UIP/HRP 为N-Histofine 公司产品，Code 414154F、S-P 法主要针对羊来源一抗、CISH-HER2 Kit 购于Invitrogen 公司产品，羊抗兔IgG-FITC 和羊抗鼠IgG-Cy3 为Sigma 公司，Dig 标记HPVKit 购于福州泰普生物科学有限公司，Dig 标记HBV 探针由本实验室制备，Tunel Kit(Dig 标记/HRP-DAB) 为Chemicon司产品。
1. 3 方法标准取材，并按GS 组织固定脱水系列套装试剂说明书操作流程进行固定、脱水、透明和包埋。免疫组化采用UIP 法与SP 法、免疫荧光组化单染和双标染色、Tunel 法和原位杂交; Dig 标记HPV 和HBV 探针，CISH-HER2 和Tunel 法操作流程参考相关文献［1］。
2 结果
2. 1 HE 包埋后的组织块可以顺利地切制3 μm 的石蜡切片，无苯型脱蜡剂在室温下5 × 2 min 可完成石蜡切片脱蜡，免疫组化染色则建议5 × 3 min 脱蜡。
2. 2 免疫组化利用人结肠癌、胃癌、肾癌、肺癌、脑胶质瘤、乳腺癌和前列腺癌等组织;动物犬、兔、大鼠和小鼠肺、脾、肝、脑和胰腺等组织，分别检测46 种不同抗原，其阳性检测率和阳性强度均与常规包埋效果基本一致。
2. 3 原位杂交应用ISH-HBV 检测5 例HBV 阳性肝癌标本5 例均阳性;ISH-HPV16 /18 探针捡测5 例宫颈癌标本，3例阳性;原位杂交CISH 法检测10 例乳腺癌HER 2 原癌基因，6 例阳性( 低扩增3 例，高扩增3 例) 与常规包埋基本一致。
2. 4 Tunel 法检测10 例大鼠实验模型肝组织，分别用GS环保试剂和常规脱水透明石蜡切片，均用GS 脱蜡液脱蜡至水，Tunel 法染色结果凋亡指数检测率基本一致。
3 讨论
格林标本推出的GS 组织固定脱水和HE 染色系列套装试剂是国内第一套相对环保的套装系列试剂。我科应用2年，GS 无醛无苯全程处理液制备的石蜡包埋切片软硬适中，切片厚薄均匀，连续性好。常规HE 染色细胞形态完整清晰，苏木精伊红染色鲜艳，对比分明。组织脱水到包埋仅需6 h，比常规所需的12 h 大大缩短。免疫组化结果阳性检测率和阳性强度与常规石蜡切片基本一致，说明该GS 无醛无苯全程组织处理液包埋的石蜡切片可用于日常的免疫组化标记和鉴别诊断。5 例宫颈癌HPV、5 例肝癌HBV 和10 例乳腺癌HER 2 结果也与常规石蜡切片基本一致。
GS 系列试剂替代传统的以甲醛二甲苯为主体的石蜡切片技术流程，在减少室内有毒有害气体的污染和毒害作用同时可杜绝大量排放此类毒害化学物质对生活环境的污染。
参考文献:
［1 ］ 倪灿荣，马大烈，戴益民，主编． 免疫组织化学实验技术及应用［M］． 北京:化学工业出版社，2006，76 － 78，81 － 82，119 －122，206 － 210．
文章转载于《诊断病理学杂志》2011（03）
作者：倪灿荣，张顺民
作者单位：第二军医大学长海医院病理科，上海200433
