lihua328

请教：我做脑组织冠状切片，厚30微米
我切后就放到冰箱冻着，准备直接免疫组化，可以吗？急！！！！
谢谢！！！！！！！！

lihua328

忘了说了，我取材是用4%的多聚甲醛灌注固定：)

lihua328

谢谢你啦，看来是我自己弄错了别人的意思,呵呵
再问一下抗体稀释一般就是用PBS吧？还有每张玻片大约需要滴多少毫升已稀释的抗体（比如我做的大鼠脑组织冠状切片），谢谢啦！！！

lihua328

引用:

下面引用由可乐猫在 2004/03/07 00:41am 发表的内容：
楼上那位，做冰冻切片之前就用醛固定那你还能冻上吗？用什么冷冻方式呢？
我记得过去用半导体冷冻才可以冻前固定。不过那已过时了，现在都现代化了。

????
不明白你的意思 :em15:

lihua328

引用:

下面引用由可乐猫在 2004/03/07 12:40pm 发表的内容：
你的贴子的主题是《冰冻切片都要固定吗？》
难道你问的是石蜡切片？石蜡切片是标本最先固定的。
冰冻切片可是新鲜标本切片后固定。
免疫组化也一样，
...

我是先用多聚甲醛固定再用蔗糖脱水，然后再实行冰冻切片啊
我的意思是是不是切完片后还要用比如丙酮等固定：）

lihua328

谢谢 fangdang和可乐猫啦：）

有的书上又说要用丙酮4度固定10分钟，不知道有什么不同？
今天我做的时候直接从冰箱拿出来就用pbs洗，结果脱片很厉害，原来之前要风干，呵呵！这风干不知又有什么时间限制没有？请教各位啦！
再次感谢！

lihua328

但是我的玻片是经过多聚赖氨酸处理过的啊，不用涂明胶了吧

lihua328

非常谢谢shanghainese！
难怪我也听一位老师说：他采用普通的冰冻切片做了很久都没做出来，后来用漂片法就做出来啦！
是不是我用这种方法一定要用漂片法啊？用普通的冰冻切片能否有可能做出来呢？
今天我试了几片染色效果不理想，我还怀疑是不是我灭活的时候用的是0.5％的H2O2甲醇溶液不行，我还打算再用3％的试试看。
请shanghainese 赐教！！万分感谢！！！

lihua328

查了一些文献，发现大家在用漂片法时，好像没有经过加正常山羊血清封闭，是不是不用啊？还有就是用漂片法是不是一抗的稀释程度要大很多啊，好像都是1：1000什么的，这样能不能做出来呢？
谢谢！！！！

lihua328

非常感谢 shanghainese 前辈！