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大家看看问题出在哪里?

大家看看问题出在哪里?

按照 shanghainese 等的指导,我用漂片法做了脑组织的免疫组化的预试,我用4%的多聚甲醛固定后,然后用20%,30%的蔗糖脱水,之后切片。我是把切好的材料贴在玻片上然后放到冰箱冷冻备用。
我用了一抗的几个梯度来实验(200,400,800),并且用PBS做了一个阴性对照:结果对照的那个标本没有染上任何颜色,但是其他几个组织却出现整片染色,不过皮质的颜色还是略深,看上去就是出现了非特异性染色。
我预试的是caspase-8,结果核都着了色,我不知道问题出在哪里?我下一步该怎么实验来排除原因呢?非常着急,恳请大家多多指教!谢谢啦

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大家看看问题出在哪里?

怎样控制DAB显色时的浓度呢?
我用的是即用型

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大家看看问题出在哪里?

还有我用的是漂片法,不好控制染色时间啊

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大家看看问题出在哪里?

非常感谢shanghainese的大力支持!
您说我的一抗浓度过高,可我也用了1:800的做啊,那是为什么呢?是不是4度过夜时间太长??
还有我的切片上背景染色并不是很明显,只是似乎大部分细胞都被着色了,不知道为什么?今天在继续摸索~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
再次感谢大家的帮助!!!!:)

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大家看看问题出在哪里?

[这个贴子最后由lihua328在 2004/03/16 06:07pm 编辑]

非常感谢shanghainese给我的文章,真是雪中送炭啊
不知道像这样的文章我平时要怎样才能搜索到啊?呵呵:)谢谢啦!!

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大家看看问题出在哪里?

还是要谢谢的!:)
我会再用其他浓度试试看,你说的多少微克/毫升说明书上有提供吗??
一抗特异性不好是不是应该换呢?还是可有其他办法?

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大家看看问题出在哪里?

是大鼠的脑,切片机是莱卡的恒温冷冻切片机:)

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