FLX-DN

老师好，我现在的免疫组化片子有以下问题。powervision法操作，二抗为中杉pv6002抗小鼠的，我做的组织是兔，一抗来源是小鼠，一直有分布不均匀的背景着色。一抗用pbs替代的阴性对照也有明显着色（DAB显色10分钟），背景着色不均匀，关节软骨着色很深。后来在一抗前加10%牛血清封闭后，没有背景着色，也没有阳性反应。但powerision法不是生物素系统的，按理说不用封闭，不知是何原因。还有，我试过不加一抗直接加二抗，DAB后也显色，这是二抗的问题吗？急盼解答！谢谢

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Incubate the sample with primary antibodies in Incubation Buffer.   
Incubation Buffer: 1% bovine serum albumin, 1% normal donkey serum, 0.3% Triton X-100™, and 0.01% sodium azide in PBS
这是怎么孵育？是浸泡到孵育液里？还是滴上放湿盒里？。。。。汗。。。。。