[code][/code]首先,灌注大鼠,500ML生理盐水。300ML4%多聚甲醛,心脏灌流,右心房插入,打开生理盐水,剪开左心耳。30%蔗糖溶液沉底,冰冻切片机,切片
1. 切片用PBS漂洗3次,10min
2. 切片移至3%过氧化氢溶液中,10min
3. PBS漂洗3次,10min
4. 切片浸入3%正常羊血清蛋白(BSA)溶液中,37℃,30min
5. 切片置入一抗4℃冰箱过夜
6. 切片用PBS漂洗3次,每次10min
7. 切片移至二抗, 37℃,30min
8. PBS漂洗3次,每次10min
9. dab显色 10min
10. PBS漂洗3次,每次10min
11. 贴片,干燥
12. 逐级酒精脱水(80%,90%,95%,100%х2每次15min),透明(二甲苯15minх2)树胶封片,晾干
使用的抗体是MILLIPORE的~~~多巴胺受体
http://www.millipore.com/catalogue/item/abn20
最近,每次试验最后的片子都有很多这种弯曲的非特异性物质。