saddle2000

我做心脏荧光，一抗生物素标记的单抗，二抗是cy3-亲和素。但是阴性对照心肌全染色了，背景很好，没心肌的地方都没染成红色。
我想没加一抗，二抗都染上色了肯定是发生了结合反应，是否是心脏的内源性生物素呢？如果我准备用鸡蛋清+5%脱脂奶封闭，有几个疑问:
1.脱脂奶封闭后是否需要洗掉？
2.脱脂奶封闭是否能代替BSA封闭？我做双标其他抗体还需要用BSA封闭吗？
3.如果用BSA封闭要求不洗，但用脱脂奶封闭又需要洗，不是也洗掉了BSA吗？
附阴性对照一张（200倍 cy3-亲和素1：100稀释）