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困惑了好久的问题

困惑了好久的问题

最近在做免疫组化,片子除了掉片不说,用了黏附玻片是终于不掉片了,但是结果出不来,是阴性的。前晚切片烤片65℃一小时,
今早脱蜡 两缸每缸7分钟,然后梯度酒精复水,水洗2分钟,PBS 3X3',水洗一分钟,H2O2灭活20分钟,水洗一分钟,PBS3X3',柠檬酸微波炉修复 高火4分钟中高火6分0钟/EDTA水煮20分钟,室温静置20分钟,PBS

3X3',加一抗 室温60分钟,PBS

3X3',加二抗室温25分钟,PBS

3X3',DAB显色,复染。请教各位我所说的以上步骤有什么错误吗?

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