starry

最近连续几天用手工做免疫组化，做的几批项目中总是有1-2个ki-67呈假阴性，之后加对照重新做，结果为阳性，可是总是出现第一次做不出来的情况，每次都有几张要重做，用机器做，ki-67每次都呈阳性，并且效果很好，实在找不到手工做不出的原因，求教！！！以下是我手工的步骤
1、烤片 80°C 1小时
2、水化 过两缸二甲苯 两缸100%酒精
3、柠檬酸修复  高压锅，水开后放片子，出气后计时3min ，停止，冷水降温。
4、冲洗
5、双氧水修复6min
6、冲洗
7、加一抗，一个半小时，37°C
8、冲洗
9、加二抗，半小时，37°C
10、冲洗
11、DAB显色
试剂盒，抗体，显色液用的福州迈新的，之前没出问题，就是最近做不出来了，求教！

starry

冷水是自来水，给高压锅降温，降到室温的，锅里的缓冲液大约20°C。

[ 本帖最后由 starry 于 2015-11-27 20:03 编辑 ]

starry

今天试了EDTA ph9 还是出现之前的结果，这次做了9个ki-67，有一个乳腺低分化癌的呈阴性，其他的多少都有阳性，还有一个泛染了。