dingwei

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原帖由 中中中 于 2009-9-8 13:47 发表
冰冻切片要不要固定过程？

所有的专业书都说冰冻切片要固定，但在实操工作中本人认为，固定并非十分必要。原因有：
固定时间太短，冰冻诊断时间总共30 分钟，切片和染色只有15分钟，诊断15分钟。而固定速度为8微 ...

冰冻切片当然要固定。固定就是要保证组织的形态和成份，主要看核的结构，染色质要清晰可见。
只是你的操作本身就非常错误，所以感觉不出固定的效果。
冰冻切好片应该立即把切片放入甲醇、95%酒精或丙酮等固定液中固定。而不是在空气中干燥后再固定。空气中干燥后的细胞核退变，成毛玻璃样，看不清染色质。
固定时间其实只要10-20秒，根本不需要5分钟。

dingwei

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原帖由 中中中 于 2009-9-25 20:40 发表
很失望，人人都在强调书上如何如何。
难道顺手切一张对照片看一眼有这么难吗！！！！

不难，十年前刚开始做冰冻时就是这样做的。后来经过反复实验，证明这个方法是错误的。难就难在你从没有做过好的片子，就分不清什么是好什么是差。执着地坚持错误，比什么都不懂的人更可怕。

dingwei

权威说了不算，你也可把冰冻切片的图放上来，大家看看到底好不好。

dingwei

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原帖由 中中中 于 2009-10-12 22:41 发表


冰晶只会出现在过度冰冻（冰冻太长时间、温度太低或降温过程太长）的情况下。

冰晶的产生是因为冷冻速度慢，细胞内和细胞间的水分向疏松区域凝聚，形成冰（冰晶），解冻后成为空洞。冷冻速度越快，冰晶越少。

dingwei

固定只是为了保持细胞形态，拿出来后和外面的空气温差过大，暴露在空气中时间太长都不会产生冰晶。内外温差大会产生细胞收缩，而不是冰晶；暴露在空气中时间太长，会引起细胞氧化、退变也不是冰晶。