shanghainese

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原帖由 zhangyanxin335 于 2012-9-18 20:16 发表
我要做免疫组化，可是采完组织后没有及时固定，直接放-80了，我想问一下，这样还能做免疫组化吗，我看有资料说会导致抗原弥散，是这样的吗？如果是有什么办法弥补吗，因为已经这样了，再采新鲜的组织也不容易，各位大 ...

采完组织后没有及时固定，直接放-80了，这样还能做免疫组化。
导致抗原弥散的原因，组织自溶了，或者冰结晶。
如果一抗的特异性不好，那是另一回事。

shanghainese

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原帖由 zhangyanxin335 于 2012-9-24 13:40 发表
好的，那谢谢你了，我还想问一下，我做完之后的背景色太严重，怎么消除呢？

您是做了石蜡切片还是冰冻切片?
您能否说说您所用的一抗的具体情况?

shanghainese

如果是自制的多抗,你用的是血清,还是purified antibody?
在多抗制作过程中,都要测抗体的滴度。不知你的多抗滴度试验结果好吗？
看看ELISA, Western Blot 怎样。

shanghainese

再有，如果是用protein G purified出来的多抗，有效抗体可能比较少。

shanghainese

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原帖由 zhangyanxin335 于 2012-10-5 11:01 发表
我是提纯后的多抗，如果有效抗体少的话，就不会出结果吗，还是阳性信号较弱？

抗体是不是没有纯化好? 以至抗体的特异性差了。或者一抗有aggregation。
总之一抗很可能有问题。

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2012-10-11 22:30 编辑 ]

shanghainese

是的。
你要把抗体现纯化好。

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2012-10-12 11:10 编辑 ]