shanghainese

引用:

下面引用由lihua328在 2004/03/05 11:23am 发表的内容：
请教：我做脑组织冠状切片，厚30微米
我切后就放到冰箱冻着，准备直接免疫组化，可以吗？急！！！！
谢谢！！！！！！！！

只要切片没有冰结晶，当然可以用。
您的组织冰冻之前已经固定了，切片后不必再固定了。

shanghainese

引用:

下面引用由lihua328在 2004/03/07 10:40pm 发表的内容：
我是先用多聚甲醛固定再用蔗糖脱水，然后再实行冰冻切片啊
我的意思是是不是切完片后还要用比如丙酮等固定：）

lihua328：
您的组织经过以上处理应该做漂片(floating section),而不是普通的冰冻切片，所以不需要丙酮4度固定和风干等等。切片在组化染色过程中始终是在浸染状态。染后一般不需苏木素套色复染。您可多看一点脑免疫组化文章，大部分用的是这种方法。

shanghainese

引用:

下面引用由lihua328在 2004/03/09 11:54am 发表的内容：
非常谢谢shanghainese！
难怪我也听一位老师说：他采用普通的冰冻切片做了很久都没做出来，后来用漂片法就做出来啦！
是不是我用这种方法一定要用漂片法啊？用普通的冰冻切片能否有可能做出来呢？
今天我试了几　...

关于是否一定要用漂片法，要由您自己决定。漂片法是脑神经组织学领域里经典的方法。由于神经细胞体积大，一般冰冻和石蜡切片(5微米)不能观察到细胞的整体。而漂片的厚度在20至40微米，适宜观察神经细胞，这是其一。其次，您要用一般冰冻和石蜡切片法也行，但形态，观感和染色结果都可能与漂片不一样。将来您的文章要发表，审稿关能否通过呢？希望您能考虑这些问题。
至於一抗的浓度，可以参考厂商的说明书。您也可以摸几个不同的浓度。
另外，不是任何抗体都能做免疫组化的。用抗体之前除了多看文献，还要向厂商多了解抗体具体使用情况。