shanghainese

引用:

下面引用由lihua328在 2004/03/13 11:33pm 发表的内容：
按照 shanghainese 等的指导，我用漂片法做了脑组织的免疫组化的预试，我用4％的多聚甲醛固定后，然后用20％，30％的蔗糖脱水，之后切片。我是把切好的材料贴在玻片上然后放到冰箱冷冻备用。
我用了一抗的几个梯 ...

Caspase-8不应出现出现在细胞核里。一种可能是一抗有问题。其可能是一抗浓度过高。现介绍一篇文章，里面有Caspase-8的染色和染色过程。里面的染色图片很漂亮，我想其方法与您的方法很相似，供您参考之用。
The Journal of Neuroscience, July 15, 1999, 19(14):5932-5941
http://www.jneurosci.org/cgi/reprint/19/14/5932.pdf
漂片法的确是有些背景染色，有时很难去除。另外，如有条件多摸几个浓度找到最佳浓度和条件。
希望您能越做越好。

shanghainese

引用:

下面引用由lihua328在 2004/03/16 11:52am 发表的内容：
非常感谢shanghainese的大力支持！
您说我的一抗浓度过高，可我也用了1：800的做啊，那是为什么呢？是不是4度过夜时间太长？？
还有我的切片上背景染色并不是很明显，只是似乎大部分细胞都被着色了，不知道为什　...

第一个问题，1：800不一定是适用浓度。有时多抗要稀释到1：2000或1：3000以上。最好用浓度概念，比如多少微克/毫升。因为各个抗体的浓度不同，在同样稀释度下浓度是不一样的。
第二个问题，如果似乎大部分细胞都被着色了，可能是您的一抗特异性不好。
第三个问题，有关文献可以到MEDLINE上寻找。
不用谢。能对您有所帮助，对大家有所帮助是我的愉快。